細胞培養中常見的汙染情況總結如下,你可以對比一下。
1、細菌:
細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。 仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次汙染的話有可能造成儲存液汙染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象! 可在培養液中加相應的抗生素處理
2、黴菌:
培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之後,細胞的活力狀態變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤裡也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌汙染。 CO2孵箱被黴菌汙染後,可把所有細胞暫時轉移,採用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽瀰漫。待過氧乙酸的氣味消散後,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防黴菌汙染,可在培養基里加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦汙染,很難挽救,制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補,建議捨棄該汙染細胞。,將環境徹底消毒,如果所有細胞都汙染,可能是系統汙染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別汙染,可能是操作問題,就要注意操作
3、支原體:
黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用於細胞培養,無任何不良反應.
4、黑蛟蟲:
可以穿透濾膜,也可以透過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之後會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種汙染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
5、真菌:
一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那麼容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被汙染了,也很難救活了。
6、原蟲:
培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性迴圈。
汙染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等
細胞培養中常見的汙染情況總結如下,你可以對比一下。
1、細菌:
細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。 仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次汙染的話有可能造成儲存液汙染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象! 可在培養液中加相應的抗生素處理
2、黴菌:
培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之後,細胞的活力狀態變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤裡也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌汙染。 CO2孵箱被黴菌汙染後,可把所有細胞暫時轉移,採用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽瀰漫。待過氧乙酸的氣味消散後,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防黴菌汙染,可在培養基里加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦汙染,很難挽救,制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補,建議捨棄該汙染細胞。,將環境徹底消毒,如果所有細胞都汙染,可能是系統汙染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別汙染,可能是操作問題,就要注意操作
3、支原體:
黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用於細胞培養,無任何不良反應.
4、黑蛟蟲:
可以穿透濾膜,也可以透過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之後會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種汙染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
5、真菌:
一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那麼容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被汙染了,也很難救活了。
6、原蟲:
培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性迴圈。
汙染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等