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  • 1 # 李大嘴愛說事

     本實驗以小麥為材料,取不同發育時期的花葯永久製片進行小麥花葯和花粉發育過程的觀察。並取發育適期的麥穗進行小麥花粉母細胞減數分裂過程和由小孢子發育為成熟花粉粒過程的塗片觀察。

      華北地區冬小麥大約在四月下旬至五月初期葉抽出葉鞘2—5釐米時,花葯中花粉母細胞進行減數分裂。此時小麥穗不同部位的小花中花葯長度約為1—2毫米。取此時的麥穗不同部位小穗固定切片,可獲得減數分裂不同階段及小孢子時期的小麥花葯製片。固定的麥穗並可用來作為觀察減數分裂過程的塗片材料。五月十日前後小麥開始揚花,麥穗不同部位小花中的花葯長度在2-3毫米左右,固定後可製取自單核花粉粒至成熟花粉粒的製片。及供塗片觀察用。

      小麥每朵小花中有三枚雄蕊。每個花葯由四個花粉囊構成。小麥花葯壁層也包括有四層不同的細胞,最外層為表皮,向內依次為藥室內壁、中層和絨氈層,而中層僅為一層細胞。小麥花粉粒為三細胞型,即成熟花粉粒中包含有一個大的營養細胞和二枚精子。觀察時,可與百合花藥和花粉粒發育情況進行比較,瞭解其共同點與區別。

     (一)不同發育時期小麥花葯製片觀察

      1.花粉母細胞時期,此時期的永久製片一般為小穗的橫切面。先在低倍物鏡下觀察製片全貌。小穗橫切面可包括1—3朵小花。區別穎片、外稃、內稃、花葯及子房或柱頭等部位。選取其中發育適期的花葯橫切面進行仔細觀察。小麥花葯包括有四個花粉囊,中間有藥隔相聯,一維管束穿過藥隔中央。花粉母細胞時期的小麥花葯壁層已有明顯分化,共有四層細胞,自外向內依次為表皮、藥室內壁(纖維層)、中層和絨氈層。表皮細胞排列緊密,相對較小,稍扁平。藥室內壁細胞較大。中層細胞在橫切面上呈扁平狀,僅一層,易與其它各層區別。花葯壁層最裡面的絨氈層細胞體積明顯較大,細胞質濃厚,有時一個細胞中具有兩個細胞核,所以容易辨認。藥室腔中排列有一圈花粉母細胞,具有明顯較大的細胞核,有時一些花葯中的花粉母細胞已進入減數分裂前期Ⅰ,其細胞核中可看到有凝聚的染色絲形成。一般一個藥室腔橫切面中可看到3一5個或更多個花粉母細胞。

    2.二分體和四分體時期,小麥小孢子形成過程中也有明顯的二分體和四分體時期,即在減數分裂的第一次分裂後,產生分隔的新壁,將母細胞先分為兩個子細胞,稱二分體,隨後進行第二次分裂,最後形成四個子細胞。這種小孢子形成的方式稱為連續型(另一種小孢子形成方式為同時型,是在減數分裂的第一次分裂後,不形成新壁,所以沒有形成二分體,而接著進行第二次分裂,產生四個細胞核,然後一次產生新壁,將母細胞分隔成四個子細胞,如蠶豆小孢子發生就屬於同時型)。小麥四分體作四面體排列。一般同一藥室中花粉母細胞的減數分裂過程基本上是同步的,但也可有一定程度的差別。所以,在同一藥室中,有時可同時看到二分體、第二次分裂各時期及四分體等不同發育時期。

      在小孢子發生的同時,小麥花葯壁的各層細胞相應也發生變化。中層細胞由於藥室內壁和絨氈層的發育長大而受到擠壓,並液泡化。在永久製片上可看到中層成為染色較深的一窄條,並不規則地間隔地出現一些空白大液泡區,夾在內壁和絨氈層之間。藥室內壁細胞仍保持完整。絨氈層細胞體積增大,具有明顯的雙核,這是由於絨氈層細胞進行了細胞核分裂而未伴隨有新壁的形成所致,其細胞質濃厚,染色較深,細胞近方形。

    3.單核花粉粒時期小麥單核花粉粒的發育情況與百合花粉粒相似。小孢子自四分體胼胝質壁中釋放後,體積增大,並進一步形成花粉內、外壁和一個萌發孔。同時,細胞質

    (二)小麥花粉母細胞減數分裂過程和花粉粒發育情況的塗片觀察

      小麥穗、小穗和小花的基本結構已在實驗三十八中觀察過。小麥穗上不同部位小花中雄蕊的發育情況是有先後差別的。一般中部小穗首先發育,然後依次向上、下逐步發育,而每一小穗則基部小花首先發育。若能選取合適的幼穗,則可利用一個幼穗上不同部位的小花中的花葯,檢查到自花粉母細胞至減數分裂各不同時期的情況,即可進行減數分裂全過程的觀察。一般以選取抽穗前7—10天左右的幼穗固定、觀察為宜。固定揚花前2—3天麥穗不同部位小花的花葯,則可觀察到由單核花粉粒至成熟花粉粒各發育時期的情況。

      取預先固定的小麥幼穗或新鮮材料,按小穗在麥穗上的排列順序,自下向上剝取各小穗中的第一和第二朵小花中的花葯,用醋酸-洋紅溶液或卡寶品紅溶液進行塗片觀察。

      塗片的具體操作如下:在擦洗乾淨的載玻片上加一滴醋酸洋紅(或卡寶品紅)溶液,將剝取的小麥花葯放在載玻片上的醋酸洋紅溶液中。用鑷子和解剖針將花葯撕開,儘量將其中的花粉母細胞或花粉粒擠出,棄去花葯壁,加蓋玻片。然後,將載玻片在酒精燈上微微加熱,以破壞其細胞質,使背景清晰(若用卡寶品紅液,則可省去加熱步驟,但需稍延長染色時間)。經加熱處理後,將載玻片平放在一張粗濾紙上,其上再蓋一張粗濾紙,以大拇指輕輕擠壓蓋玻片,注意擠壓時勿使蓋玻片錯位。粗濾紙可吸去多餘的染液。然後,即可將製片進行鏡檢觀察。

      觀察時先在低倍物鏡下檢查,要注意將花葯壁層的體細胞與不同發育時期花粉母細胞相區別,尋找花粉母細胞比較集中的部位,移至視野中央,再轉換到高倍物鏡下仔細觀察。對照小麥花粉母細胞減數分裂過程和花粉粒發育圖,判斷所檢查花葯中花粉粒的發育時期。

      (三)若干種植物花粉整體封片觀察

      透過對油松、向日葵、紫丁香、合歡、月見草等植物花粉整體封片的觀察,瞭解花粉形態的多樣性。

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