結核桿菌H37Ra感染RAW264.7巨噬細胞株24 h後收集上清液,用Griess法檢測一氧化氮(NO),化學法檢測過氧化氫(H2O2)的產生,逆轉錄~聚合酶鏈反應(RT~PCR)法檢測感染後巨噬細胞IL~12和TNF~αmRNA的表達,ELISA法檢測細胞因子IL~12和TNF~α的含量。結果:結核桿菌H37Ra感染巨噬細胞後產生的NO和H2O2水平均顯著升高,同時IL~12和TNF~α的分泌和表達也明顯增加(P
thp1是由人急性單核細胞白血病分離得到的單核細胞系。THP-1細胞特別依賴細胞濃度,ATCC上10 5到106每ML,是一個很高的密度,細胞少了就不太容易養好。
注意細胞的密度一定要高,介於5×105—— 106/ML之間,增值的快。細胞數量太少,不適合THP-1生長,一般狀態不好的THP-1在培養了3天后數量仍然不多,繼續培養一天或者兩天,培養基 嚴重泛黃,細胞數會增加。這一點不同於同是單核細胞系的U937細胞。
THP-1細胞適合在細胞Ph環境偏酸性環境生長,對培養基變化非常敏感,所以 儘量使用相同Ph的1640。
傳代後切忌常移出培養箱觀察,否則會影響細胞生長,狀態變差,一般首先表現為細胞內顆粒變多。一般THP-1 生長相當快,對於狀態已經不好的情況,建議傳代後3~4天再觀察,一般4天時間培養基已明顯泛黃,細胞數量巨增;1)THP-1細胞喜歡酸性條件,你不要老是換培養基。越酸的條件,細胞密度越大,細胞就長得越好;2)不要頻繁換液,一般2-3次換液離心一次(只是補充培養基);3) 使用1640(ATCC推薦),注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了,寧酸勿鹼; 4)注意凍存的時候密度大些,推薦用血清凍存。
供參考。
結核桿菌H37Ra感染RAW264.7巨噬細胞株24 h後收集上清液,用Griess法檢測一氧化氮(NO),化學法檢測過氧化氫(H2O2)的產生,逆轉錄~聚合酶鏈反應(RT~PCR)法檢測感染後巨噬細胞IL~12和TNF~αmRNA的表達,ELISA法檢測細胞因子IL~12和TNF~α的含量。結果:結核桿菌H37Ra感染巨噬細胞後產生的NO和H2O2水平均顯著升高,同時IL~12和TNF~α的分泌和表達也明顯增加(P
thp1是由人急性單核細胞白血病分離得到的單核細胞系。THP-1細胞特別依賴細胞濃度,ATCC上10 5到106每ML,是一個很高的密度,細胞少了就不太容易養好。
注意細胞的密度一定要高,介於5×105—— 106/ML之間,增值的快。細胞數量太少,不適合THP-1生長,一般狀態不好的THP-1在培養了3天后數量仍然不多,繼續培養一天或者兩天,培養基 嚴重泛黃,細胞數會增加。這一點不同於同是單核細胞系的U937細胞。
THP-1細胞適合在細胞Ph環境偏酸性環境生長,對培養基變化非常敏感,所以 儘量使用相同Ph的1640。
傳代後切忌常移出培養箱觀察,否則會影響細胞生長,狀態變差,一般首先表現為細胞內顆粒變多。一般THP-1 生長相當快,對於狀態已經不好的情況,建議傳代後3~4天再觀察,一般4天時間培養基已明顯泛黃,細胞數量巨增;1)THP-1細胞喜歡酸性條件,你不要老是換培養基。越酸的條件,細胞密度越大,細胞就長得越好;2)不要頻繁換液,一般2-3次換液離心一次(只是補充培養基);3) 使用1640(ATCC推薦),注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了,寧酸勿鹼; 4)注意凍存的時候密度大些,推薦用血清凍存。
供參考。