氯仿是分子量比較大的有機溶劑,在提取RNA時,氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離.DNA提取過程 有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和DNA脫離,DNA進入水相.但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離,否則DNA會釋放到水相.不管有酚也好,沒有酚也好,氯仿本身也對蛋白有變性作用,劇烈的震盪,很容易使得DNA的親水基團,與水相接觸.所以不要劇烈震盪.
異丙醇的作用是透過-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA鏈中的親水基團受到保護,等同於沉澱,但是這是個反應時發生在水相中,與前面的氯仿不矛盾.
氯仿的作用有多個方面,一是作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並透過離心除去,同時也透過變性作用抑制RNase活性；二是RNA提取試劑中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配試劑提的方法也用苯酚,抽提蛋白時也會用到苯酚）,苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要透過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉；三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質（比如油脂、脂溶性色素等）,起到一定除雜作用
通常氯仿裡面會加少量異戊醇（1/25）,減少蛋白質在變性過程中由於震盪產生的泡沫,影響後續操作,不過個人經驗感覺加不加沒什麼太大區別,也許是我的樣品裡蛋白不多吧
異丙醇是沉澱核酸用的,作用和乙醇一樣.只不過用量少一點,0.6V~1V就夠了,不像乙醇沉澱需要至少2V,一般需要2.5倍體積.在水相很多,離心管容積有限,加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉澱.不過感覺效果不如乙醇,偶爾會有沉澱不出來東西的時候
氯仿是分子量比較大的有機溶劑,在提取RNA時,氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離.DNA提取過程 有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和DNA脫離,DNA進入水相.但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離,否則DNA會釋放到水相.不管有酚也好,沒有酚也好,氯仿本身也對蛋白有變性作用,劇烈的震盪,很容易使得DNA的親水基團,與水相接觸.所以不要劇烈震盪.
異丙醇的作用是透過-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA鏈中的親水基團受到保護,等同於沉澱,但是這是個反應時發生在水相中,與前面的氯仿不矛盾.
氯仿的作用有多個方面,一是作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並透過離心除去,同時也透過變性作用抑制RNase活性；二是RNA提取試劑中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配試劑提的方法也用苯酚,抽提蛋白時也會用到苯酚）,苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要透過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉；三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質（比如油脂、脂溶性色素等）,起到一定除雜作用
通常氯仿裡面會加少量異戊醇（1/25）,減少蛋白質在變性過程中由於震盪產生的泡沫,影響後續操作,不過個人經驗感覺加不加沒什麼太大區別,也許是我的樣品裡蛋白不多吧
異丙醇是沉澱核酸用的,作用和乙醇一樣.只不過用量少一點,0.6V~1V就夠了,不像乙醇沉澱需要至少2V,一般需要2.5倍體積.在水相很多,離心管容積有限,加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉澱.不過感覺效果不如乙醇,偶爾會有沉澱不出來東西的時候