回覆列表
  • 1 # 未初心之助

    曾經看到過人的IFN-Y單位和濃度的關係1200U/ml=40ng/ml,但不知對你買的是否適用,不放心的話就自己測一下吧,或者查查用你同樣東西的文獻!干擾素的一般特性: 比活性:指每毫克蛋白中所含干擾素的活性單位。 活性單位:國內標準是指在人羊膜傳代細胞(WISH)被皰疹病毒進攻時,能保護一半的細胞不被攻擊的干擾素稀釋度的倒數。例如,將干擾素稀釋到300萬分之一的濃度時,它能使試驗所用的人羊膜傳代細胞中有一半沒有被皰疹病毒所殺滅,此時所用干擾素的活性為300萬單位。 干擾素(IFN)生物學活性檢測干擾素(IFN)根據其產生細胞不同和理化性質、犐z物學特性的差異可分為α干擾素(IFN-α)、β干擾素(IFN-β)和γ-干擾素(IFN-γ)。它們在機體免疫調節、抗病毒感染中具有重要作用。檢測IFN的方法主要分為定量測定(常用ELISA)和生物學活性的檢測,後者較為常用。 (一)原理 干擾素能刺激某些指示細胞(如人羊膜上皮細胞Wish株、人喉癌細胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺單層細胞)產生抗病毒蛋白,從而使細胞免受水皰性口炎病毒(VSV)的攻擊,根據待測樣品不同稀釋度的保護能力,計算出干擾素生物學活性單位。 (二) 操作步驟 96孔培養板中加入不同稀釋度的IFN和標準IFN, 每個稀釋度設3孔,每孔50μl,病毒對照不加IFN ↓ 每孔加入100μl 1.5~2×105/ ml Wish 或Hep-2細胞懸液,37℃、CO?孵箱培養6~12h, 使細胞貼壁為單層 ↓ 每孔加入50μl含100個 TCID50 VSV, 細胞對照不加病毒液 ↓ 根據細胞病變狀態,終止培養前3~4h 加入5mg/ml MTT, 15μL/孔 ↓ 加入適量生理鹽水,用滴管輕輕吹吸 棄去懸浮病變細胞和死細胞 ↓ 200μl/孔 二甲亞碸(DMSO),作用10min ↓ 測OD(570nm),表示活細胞中含甲 的量, 也可用剛果紅攝入法、結晶紫染色法 測定IFN對活細胞的保護水平 計算: 以保護半數(50%)細胞免受病毒損害的最高干擾素稀釋度為1個干擾素活性單位。也可從標準曲線中求得待測樣品的IFN活性單位。 (三) 試劑和器材 1. VSV 2. WISH、HeP-2細胞株或人胚肌皮或肺單層培養物。 3. MTT[3-(4,5二甲噻唑-2-yl)-2,5-2苯基-四唑溴鹽],二甲亞碸(DMSO),剛果紅,結晶紫等。 4. 10%FCS RPMI1640, 培養板、培養瓶、CO?孵箱、超淨臺、酶聯檢測儀。 (四) 注意事項 1. 實驗時先加IFN,後加指示細胞,以使細胞均勻分佈於培養板底部。 2. 本法對天然培養上清或重組IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可檢測其活性單位。

  • 中秋節和大豐收的關聯?
  • 身份證丟了第一時間應該做什麼?為什麼?