1、RT-PCR: RT-PCR 原理:首先提起RNA,然後用逆轉錄酶與MRNA為模板進行CDNA第一鏈的合成,然後的原理和PCR就一樣了! RT-PCR意義:RT-PCR是個半定量的試驗,可以確定在MRNA水平的表達差異,即在轉錄水平 !
2、免疫PCR(immuno polymerase chain reaction , IPCR IPCR原理:是用一段已知DNA 分子標記抗體作為探針,用此探針與待測抗原反應,PCR 擴增粘附在抗原抗體複合物上的這段DNA 分子,電泳定性,根據特異性PCR 產物的有無,來判斷待測抗原是否存在。 IPCR意義:免疫PCR 是迄今最敏感的一種抗原檢測方法,理論上可以檢測單個抗原分子,但實踐中它的敏感性受許多因素的影響,如連線分子、顯示系統的選擇、DNA 報告分子的濃度、PCR 迴圈次數等。IPCR結合了酶聯免疫分析的多功能性和PCR的擴增能力和靈敏性。其結果,ELISA的最低的檢測限度被擴大了100-10000倍。由於PCR 產物在抗原量未達到飽和前與抗原抗體複合物的量成正比,因此免疫PCR 還可用於抗原的半定量試驗。
3、巢式PCR 巢式PCR原理:是用內外兩對引物擴增複製數較低的片段.先用外引物進行第一輪反應,將產物適當的稀釋,然後用內引物繼續擴增. 巢式PCR意義:比較適合微量DNA或者石蠟組織抽提的DNA
4、實時熒光PCR:利用熒光來檢測PCR產物,PCR每迴圈一次就收集一個數據,透過實時擴增曲線,準確確定CT值,從而確定其實DNA複製數
5、原位PCR技術:原位PCR就是在組織細胞裡進行PCR反應,它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點,是細胞學科研與臨床診斷領域裡的一項有較大潛力的新技術. 原位PCR是Hasse等於1990年建立的,實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.其基本方法為①固定組織或細胞:將組織細胞固定於預先用四氟乙烯包被的玻片上,並用多聚甲醛處理,再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h後,96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上,加PCR反應液,覆蓋並加液體石蠟後,直接放在擴增儀的金屬板上,進行PCR迴圈擴增.有的基因擴增儀帶有專門用於原位PCR的裝置.④雜交PCR擴增結束後,用標記的寡核苷酸探針進行原位雜交.⑤顯微鏡觀察結果.
另外還有膜結合PCR、錨定PCR、固著PCR、原位PCR、不對稱PCR、長距離PCR、降落傘PCR、梯度PCR等30幾種PC
1、RT-PCR: RT-PCR 原理:首先提起RNA,然後用逆轉錄酶與MRNA為模板進行CDNA第一鏈的合成,然後的原理和PCR就一樣了! RT-PCR意義:RT-PCR是個半定量的試驗,可以確定在MRNA水平的表達差異,即在轉錄水平 !
2、免疫PCR(immuno polymerase chain reaction , IPCR IPCR原理:是用一段已知DNA 分子標記抗體作為探針,用此探針與待測抗原反應,PCR 擴增粘附在抗原抗體複合物上的這段DNA 分子,電泳定性,根據特異性PCR 產物的有無,來判斷待測抗原是否存在。 IPCR意義:免疫PCR 是迄今最敏感的一種抗原檢測方法,理論上可以檢測單個抗原分子,但實踐中它的敏感性受許多因素的影響,如連線分子、顯示系統的選擇、DNA 報告分子的濃度、PCR 迴圈次數等。IPCR結合了酶聯免疫分析的多功能性和PCR的擴增能力和靈敏性。其結果,ELISA的最低的檢測限度被擴大了100-10000倍。由於PCR 產物在抗原量未達到飽和前與抗原抗體複合物的量成正比,因此免疫PCR 還可用於抗原的半定量試驗。
3、巢式PCR 巢式PCR原理:是用內外兩對引物擴增複製數較低的片段.先用外引物進行第一輪反應,將產物適當的稀釋,然後用內引物繼續擴增. 巢式PCR意義:比較適合微量DNA或者石蠟組織抽提的DNA
4、實時熒光PCR:利用熒光來檢測PCR產物,PCR每迴圈一次就收集一個數據,透過實時擴增曲線,準確確定CT值,從而確定其實DNA複製數
5、原位PCR技術:原位PCR就是在組織細胞裡進行PCR反應,它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點,是細胞學科研與臨床診斷領域裡的一項有較大潛力的新技術. 原位PCR是Hasse等於1990年建立的,實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.其基本方法為①固定組織或細胞:將組織細胞固定於預先用四氟乙烯包被的玻片上,並用多聚甲醛處理,再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h後,96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上,加PCR反應液,覆蓋並加液體石蠟後,直接放在擴增儀的金屬板上,進行PCR迴圈擴增.有的基因擴增儀帶有專門用於原位PCR的裝置.④雜交PCR擴增結束後,用標記的寡核苷酸探針進行原位雜交.⑤顯微鏡觀察結果.
另外還有膜結合PCR、錨定PCR、固著PCR、原位PCR、不對稱PCR、長距離PCR、降落傘PCR、梯度PCR等30幾種PC