Solexa高通量測序法原理 Solexa方法是利用單分子陣列測試genotyping，此種測序法首先是將DNA從細胞中提取，然後將其打斷到約100－200bp大小，再將接頭連線到片段上，經PCR擴增後製成Library。隨後在含有接頭的晶片（flowcell）上將已加入接頭的DNA片段繫結在flowcell上，經反應，將不同片段擴增。在下一步反應中，四種熒游標記的染料應用邊合成邊測序（SequencingBySynthesis）的原理，在每個迴圈過程裡，熒游標記的核苷和聚合酶被加入到單分子陣列中。互補的核苷和核苷酸片斷的第一個鹼基配對，透過酶加入到引物上。多餘的核苷被移走。這樣每個單鏈DNA分子透過互補鹼基的配對被延伸，利用生物發光蛋白，比如螢火蟲的熒光素酶，可透過鹼基加到引物後端時所釋放出的焦磷酸鹽來提供檢測訊號。針對每種鹼基的特定波長的鐳射激發結合上的核苷的標記，這個標記會釋放出熒光。熒光訊號被CCD採集，CCD快速掃描整個陣列檢測特定的結合到每個片斷上的鹼基。透過上述的結合，檢測可以重複幾十個迴圈，這樣就有可能決定核苷酸片斷中的幾十個鹼基。 Solexa的這種方法，可在一個反應中同時加入4種核苷的標籤，採用邊合成邊測序（SBS－sequencingbysynthesis），可減少因二級結構造成的一段區域的缺失。並具有所需樣品量少，高通量，高精確性，擁有簡單易操作的自動化平臺和功能強大等特點，此反應可以同時檢測上億個核苷酸片斷,因此在同一個晶片或幾個晶片上花費很少（只需常規方法的1％）的成本就可測試全基因組。 隨著DNA測序表達譜產品（DNAsequencing,expressionprofiling）以及microRNA分析平臺-SolexaGenomeAnalysisSystem.相繼問世，使得此種方法在更多的領域得到應用。 Illumina公司的Solexa測序技術為廣大使用者提供了強大的下一代測序方法，為目前遺傳分析和功能基因組等熱門研究領域的部分熱門課題提出了全新的應用方案。 測序與重測序 無論您需要測定的是整個基因組的序列還是基因組上一個大片斷候選區域的序列，IlluminaGenomeAnalyzer系統都是當今世界上最先進、最經濟的平臺。Solexa測序技術和可逆中止化合物染料（reversibleterminatorchemistry）奠定了在下一代測序技術中高質量、高通量、低成本資料產出的基礎。 表達譜分析 透過對樣本中數以百萬計的cDNA標籤同時進行序列測定，GenomeAnalyzer系統可以使您對整個轉錄組進行數字化的分析，而成本僅僅維持在與目前其他模擬化分析技術同樣的水平。由於我們的技術無需利用任何轉錄子特異性雜交探針，您可以同時進行全基因組轉錄子的發掘與定量分析，而無需事先知道基因組的註釋情況。 小RNA鑑定與定量分析 Solexa測序技術可以提供一套全新獨特的，適用於各個物種的小RNA深度鑑定與定量分析研究平臺。透過大量的平行測序，研究人員可以發掘、鑑定並定量出任何物種全基因組水平的小RNA圖譜。應用這種低成本快速測定數百萬標籤序列的新方法，IlluminaGenomeAnalyzer提供瞭解密小RNA圖譜獨一無二的方法。 ------------------------------------------------------------ 轉自來寶網，http://www.labbase.net/Default.aspx 參考資料： http://www.labbase.net/Default.aspx
Solexa高通量測序法原理 Solexa方法是利用單分子陣列測試genotyping，此種測序法首先是將DNA從細胞中提取，然後將其打斷到約100－200bp大小，再將接頭連線到片段上，經PCR擴增後製成Library。隨後在含有接頭的晶片（flowcell）上將已加入接頭的DNA片段繫結在flowcell上，經反應，將不同片段擴增。在下一步反應中，四種熒游標記的染料應用邊合成邊測序（SequencingBySynthesis）的原理，在每個迴圈過程裡，熒游標記的核苷和聚合酶被加入到單分子陣列中。互補的核苷和核苷酸片斷的第一個鹼基配對，透過酶加入到引物上。多餘的核苷被移走。這樣每個單鏈DNA分子透過互補鹼基的配對被延伸，利用生物發光蛋白，比如螢火蟲的熒光素酶，可透過鹼基加到引物後端時所釋放出的焦磷酸鹽來提供檢測訊號。針對每種鹼基的特定波長的鐳射激發結合上的核苷的標記，這個標記會釋放出熒光。熒光訊號被CCD採集，CCD快速掃描整個陣列檢測特定的結合到每個片斷上的鹼基。透過上述的結合，檢測可以重複幾十個迴圈，這樣就有可能決定核苷酸片斷中的幾十個鹼基。 Solexa的這種方法，可在一個反應中同時加入4種核苷的標籤，採用邊合成邊測序（SBS－sequencingbysynthesis），可減少因二級結構造成的一段區域的缺失。並具有所需樣品量少，高通量，高精確性，擁有簡單易操作的自動化平臺和功能強大等特點，此反應可以同時檢測上億個核苷酸片斷,因此在同一個晶片或幾個晶片上花費很少（只需常規方法的1％）的成本就可測試全基因組。 隨著DNA測序表達譜產品（DNAsequencing,expressionprofiling）以及microRNA分析平臺-SolexaGenomeAnalysisSystem.相繼問世，使得此種方法在更多的領域得到應用。 Illumina公司的Solexa測序技術為廣大使用者提供了強大的下一代測序方法，為目前遺傳分析和功能基因組等熱門研究領域的部分熱門課題提出了全新的應用方案。 測序與重測序 無論您需要測定的是整個基因組的序列還是基因組上一個大片斷候選區域的序列，IlluminaGenomeAnalyzer系統都是當今世界上最先進、最經濟的平臺。Solexa測序技術和可逆中止化合物染料（reversibleterminatorchemistry）奠定了在下一代測序技術中高質量、高通量、低成本資料產出的基礎。 表達譜分析 透過對樣本中數以百萬計的cDNA標籤同時進行序列測定，GenomeAnalyzer系統可以使您對整個轉錄組進行數字化的分析，而成本僅僅維持在與目前其他模擬化分析技術同樣的水平。由於我們的技術無需利用任何轉錄子特異性雜交探針，您可以同時進行全基因組轉錄子的發掘與定量分析，而無需事先知道基因組的註釋情況。 小RNA鑑定與定量分析 Solexa測序技術可以提供一套全新獨特的，適用於各個物種的小RNA深度鑑定與定量分析研究平臺。透過大量的平行測序，研究人員可以發掘、鑑定並定量出任何物種全基因組水平的小RNA圖譜。應用這種低成本快速測定數百萬標籤序列的新方法，IlluminaGenomeAnalyzer提供瞭解密小RNA圖譜獨一無二的方法。 ------------------------------------------------------------ 轉自來寶網，http://www.labbase.net/Default.aspx 參考資料： http://www.labbase.net/Default.aspx