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  • 1 # 使用者6110574993813

    細胞凍存時是逐步緩慢冷凍的,如果細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍,細胞內外的水分都會很快形成冰晶,冰晶的形成將引起非常多的不良影響。冰晶會造成細胞內空間結構的變化,蛋白質變性,還能直接破壞DNA的正常結構,直接導致細胞死亡。所以凍存細胞的時候需要採用甘油或者二甲基亞碸(DMSO)來作為保護劑,這兩種物質能降低冰點,增加細胞膜的通透性,使細胞內的水分滲透到細胞外形成冰晶,減少歲細胞內的破壞。在實際操作的時候,要按照一定的時間、程式來逐步降低溫度,並不是直接放到液氮中進行“速凍”。。降溫過快會影響水分滲出,過慢則促進冰晶的形成。以往傳統有采用:

    將凍存的細胞置於4℃2h,0℃4h,-20℃過夜,次日取出懸掛液氮罐口30min後,下降到液氮中儲存。(龔守良.實用基礎醫學實驗技術[M].吉林:吉林科學技術出版社,1990.233-245.)也有文獻表示這樣的方法並不好,而是採用:將所需凍存的細胞加入凍存液後直接置於-70℃冰箱中過夜,第2天放入液氮中。(曾豔, 付浩, 韋星呈,等. 腫瘤細胞凍存方法的探討[C]. 第五屆瀋陽科學學術年會. 2008:156-157.)在細胞培養方面,司徒鎮強在1996年出版的《細胞培養》一書中給出了3種不同的方法。1、標準的凍存程式為降溫速率:1~2℃/分;當溫度達到-25℃以下時,可增至5~10℃/分;到-100℃時,可迅速放入液氮中。這裡可以使用能精確控制溫度的細胞凍存器。如果沒有該裝置,還給出了其他方法:2、將細胞放入-70℃冰箱中,經過3h後取出,放入液氮內。3、或者將細胞從液氮容器口緩慢放入,按照1℃/分的速度降溫,在30~40分鐘內到達液氮表面,保持30分鐘後放入液氮。(司徒鎮強. 細胞培養[M]. 世界圖書出版公司西安分公司, 1996.)理論上按照程式進行凍存的細胞,在液氮充足,溫度不發生巨大變化的條件下,是可以長年儲存的。而在-70℃冰箱中,儘管溫度也很低,但是儲存的時間要顯著低於液氮。所以回到題主的問題,實驗室進行細胞儲存是需要加入保護劑,以及按照一定的規範流程進行操作的,並不是直接扔到液氮中,更不是放到普通冰箱裡。

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