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  • 1 # yygpd25108

    博凌科為解答:周圍細胞密集,中間細胞稀少這種情況一般是種板時培養液過少,液麵總是呈一凹面,如果液麵過低,孔中間就基本上沒什麼細胞,所以種板時一定不能吝嗇培養液,待貼壁後可以用比較 少量的培養液處理周圍細胞稀少,中間細胞密集:這種情況一般是種板後過於晃動,特別是旋轉著晃動.有人才用十字方向的晃動方法使細胞分散均勻.但我個人認為,將細胞加入孔後, 用槍或移液器充分吹打混勻後就不用,也不能再晃動,甚至拿著孔板走路帶來的震動都會 讓細胞往中間集中.當然,無論是哪種情況,首先都需要保證細胞在種板時時均勻分佈的,即種板時的細胞懸液一定要混勻細胞分佈均勻與否有一點很關鍵,即每種細胞是有個體差異的,別人的細胞操作不一定適合於你.所以要靠自己摸索,且找出專屬於自己細胞的一套規律,就 我個人而言,有如下經驗:

    1.所有待接種的細胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。

    2.按資料記載,24孔板的液體量為1ml,個人也覺得1ml的量足矣。

    3.接種時,要慢慢加樣,且記得輕微旋轉槍頭,這樣做對細胞均勻分佈有一定效果。

    4.接種後最好直接放入培養箱讓細胞適應培養板這個新的環境,個人認為沒有必要在室溫放置一段時間。

    5.根據細胞的特性,細胞均喜歡聚集在邊緣生長,所以我考慮到,你的問題還有可能是接種時的細胞密度不夠,導致周邊密集,中間稀疏的錯覺。你的拌種 密度是多少?另要慢慢加樣,且記得輕微旋轉槍頭的意思就是:加樣不能太快,避免細胞在一個加樣處聚集,且注意在不同的部位進行加樣,即邊加邊活動槍頭,人為 使細胞趨於均勻分佈,我個人覺得有一定的效果,不知這次我解釋清楚沒有。

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