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2021-02-04 12:23
什麼樣的培養基能夠培養黴菌和酵母菌最為準確?
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1 # 使用者8542928681829
培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。
有的培養基還含有抗菌素和色素。按所用原料不同,可分為兩類:應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的,稱為天然培養基;應用化學藥品配成並標明成分的,稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基,大多為合成培養基。由於液體培養基不易長期保管,現在均改制成粉末。培養基由於配製的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後,易被細菌汙染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處儲存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在2~6。C的冰箱內。常見培養基有: 1、細菌培養基 配方一 牛肉膏瓊脂培養基 牛肉膏0.3克 ,蛋白腖1.0克,氯化鈉 0.5克,瓊脂 1.5克, 水 100毫升 在燒杯內加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號後,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解後,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解後補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2~7.6,分裝在各個試管裡,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌30分鐘。配方二 馬鈴薯培養基 取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末後,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號,煮沸,轉用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末乾燥處理,濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的幹牛心,滅菌,備用。配方三 根瘤菌培養基 葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克 碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克 酵母粉 0.4克 瓊脂 20克 水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升 先把瓊脂加水煮沸溶解,然後分別加入其他組分,攪拌使溶解後,分裝,滅菌,備用。2、放線菌培養基 配方一 澱粉瓊脂培養基(高氏培養基) 可溶性澱粉 2克 硝酸鉀 0.1克 磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克 硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克 瓊脂 2克 水 100毫升 先把澱粉放在燒杯裡,用5毫升水調成糊狀後,倒入95毫升水,攪勻後加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解後,補足失水。調整pH值到7.2~7.4,分裝後滅菌,備用。配方二 麵粉瓊脂培養基 麵粉 60克 瓊脂 20克 水 1000毫升 把麵粉用水調成糊狀,加水到500毫升,放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解後,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。3、真菌培養基 配方一 薩市(Sabouraud’s)培養基 蛋白腖 10克 瓊脂 20克 麥芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白腖、瓊脂加水後,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解後,加入40克麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然後分裝,滅菌,備用。本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養基 把馬鈴薯洗淨去皮,取200克切成小塊,加水1000毫升,煮沸半小時後,補足水分。在濾液中加入10克瓊脂,煮沸溶解後加糖20克(用於培養黴菌的加入蔗糖,用於培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。配方三 黃豆芽汁培養基 黃豆芽 100克 瓊脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗淨黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解後放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000毫升,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到7.2~7.4,可用來培養細菌和放線菌。配方四 豌豆瓊脂培養基 豌豆 80粒 瓊脂 5克 水 200毫升 取80粒幹豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾後,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。4、食用菌菌種培養基 配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 瓊脂 18克 把馬鈴薯洗淨去皮後,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克,加水1000毫升,煮沸20分鐘後,過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解後,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格,可以不測定。配方二 綜合馬鈴薯培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克 葡萄糖 20克 維生素 10毫克 瓊脂 18克 先配製20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解後補足水分,調整pH值到6。分裝,滅菌,備用。該培養基用於培養和儲存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。5.菸草的培養基 在植物組織培養時,透過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽 CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化 愈傷組織誘導培養基製備 以MS培養基母液為基礎,向潔淨鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配製得MS培養基後,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然後加入實際配製培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖後攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置於電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然後用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鐘使之混合均勻後分裝於三角瓶中. 菸草葉片愈傷組織誘導 取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置於無菌培養皿中,並用解 剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然後將其接種於準備好的培養基上,每瓶接種 5小片,一共接種6瓶.接種後的三角平置於24條件下黑暗培養1周,然後在同 樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀 察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率. 器官分化及植株再生培養 將誘導的愈傷組織按型別分別轉入分化培養基上,置於連續光照,溫度20-22 C條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況. 愈傷組織誘導的總體情況 菸草愈傷組織誘導培養4周後,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而 未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發 生汙染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為 60.0℅, 在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由於實驗過程中,外植 體即菸草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整 個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小. 特殊培養基: 一 選擇性培養基 1酵母菌富集培養基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉紅0.003% pH4.5 2 Ashby無氮培養基 富集好養自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02% 二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5% 二 鑑別培養基 EMB培養基,常用於鑑別E.coli 蛋白腖 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g 蒸餾水1000g pH7.2 分離海洋微生物的培養基配方 2216E培養基配方(固體培養基) 蛋白腖 5克 酵母膏 1克 磷酸高鐵 0.01克 瓊脂 15-20克 陳海水 1000毫升 煮沸氫氧化納(5%)的溶液調PH值7.6—7.8
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有的培養基還含有抗菌素和色素。按所用原料不同,可分為兩類:應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的,稱為天然培養基;應用化學藥品配成並標明成分的,稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基,大多為合成培養基。由於液體培養基不易長期保管,現在均改制成粉末。培養基由於配製的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後,易被細菌汙染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處儲存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在2~6。C的冰箱內。常見培養基有: 1、細菌培養基 配方一 牛肉膏瓊脂培養基 牛肉膏0.3克 ,蛋白腖1.0克,氯化鈉 0.5克,瓊脂 1.5克, 水 100毫升 在燒杯內加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號後,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解後,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解後補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2~7.6,分裝在各個試管裡,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌30分鐘。配方二 馬鈴薯培養基 取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末後,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號,煮沸,轉用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末乾燥處理,濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的幹牛心,滅菌,備用。配方三 根瘤菌培養基 葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克 碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克 酵母粉 0.4克 瓊脂 20克 水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升 先把瓊脂加水煮沸溶解,然後分別加入其他組分,攪拌使溶解後,分裝,滅菌,備用。2、放線菌培養基 配方一 澱粉瓊脂培養基(高氏培養基) 可溶性澱粉 2克 硝酸鉀 0.1克 磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克 硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克 瓊脂 2克 水 100毫升 先把澱粉放在燒杯裡,用5毫升水調成糊狀後,倒入95毫升水,攪勻後加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解後,補足失水。調整pH值到7.2~7.4,分裝後滅菌,備用。配方二 麵粉瓊脂培養基 麵粉 60克 瓊脂 20克 水 1000毫升 把麵粉用水調成糊狀,加水到500毫升,放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解後,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。3、真菌培養基 配方一 薩市(Sabouraud’s)培養基 蛋白腖 10克 瓊脂 20克 麥芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白腖、瓊脂加水後,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解後,加入40克麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然後分裝,滅菌,備用。本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養基 把馬鈴薯洗淨去皮,取200克切成小塊,加水1000毫升,煮沸半小時後,補足水分。在濾液中加入10克瓊脂,煮沸溶解後加糖20克(用於培養黴菌的加入蔗糖,用於培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。配方三 黃豆芽汁培養基 黃豆芽 100克 瓊脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗淨黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解後放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000毫升,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到7.2~7.4,可用來培養細菌和放線菌。配方四 豌豆瓊脂培養基 豌豆 80粒 瓊脂 5克 水 200毫升 取80粒幹豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾後,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。4、食用菌菌種培養基 配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 瓊脂 18克 把馬鈴薯洗淨去皮後,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克,加水1000毫升,煮沸20分鐘後,過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解後,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格,可以不測定。配方二 綜合馬鈴薯培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克 葡萄糖 20克 維生素 10毫克 瓊脂 18克 先配製20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解後補足水分,調整pH值到6。分裝,滅菌,備用。該培養基用於培養和儲存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。5.菸草的培養基 在植物組織培養時,透過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽 CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化 愈傷組織誘導培養基製備 以MS培養基母液為基礎,向潔淨鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配製得MS培養基後,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然後加入實際配製培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖後攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置於電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然後用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鐘使之混合均勻後分裝於三角瓶中. 菸草葉片愈傷組織誘導 取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置於無菌培養皿中,並用解 剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然後將其接種於準備好的培養基上,每瓶接種 5小片,一共接種6瓶.接種後的三角平置於24條件下黑暗培養1周,然後在同 樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀 察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率. 器官分化及植株再生培養 將誘導的愈傷組織按型別分別轉入分化培養基上,置於連續光照,溫度20-22 C條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況. 愈傷組織誘導的總體情況 菸草愈傷組織誘導培養4周後,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而 未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發 生汙染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為 60.0℅, 在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由於實驗過程中,外植 體即菸草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整 個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小. 特殊培養基: 一 選擇性培養基 1酵母菌富集培養基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉紅0.003% pH4.5 2 Ashby無氮培養基 富集好養自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02% 二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5% 二 鑑別培養基 EMB培養基,常用於鑑別E.coli 蛋白腖 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g 蒸餾水1000g pH7.2 分離海洋微生物的培養基配方 2216E培養基配方(固體培養基) 蛋白腖 5克 酵母膏 1克 磷酸高鐵 0.01克 瓊脂 15-20克 陳海水 1000毫升 煮沸氫氧化納(5%)的溶液調PH值7.6—7.8