用掃描電鏡方法簡便快速.

①相差顯微境檢測：將細胞按種於事先放置於培養瓶內的蓋玻片上，24h後取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位於細胞表面和細胞之間。

②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內含有的DNA著色，染色後用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細胞接種蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然後用生理鹽水漂洗．置於用生理鹽水配濃度為50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色後用蒸溜水洗1—2min．向細胞面滴加pH5．5磷酸緩衝液數滴，然後置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在於細胞同圍或附於細胞膜表面的亮綠色小點。

④DNA分子條文檢查或支原體培養等方法：檢出率高．但方法較為複雜

實驗步驟

1.取200微升細胞上清液（或細胞懸液）。

2.將上述細胞樣品在95℃條件下水浴加熱2分鐘，作為樣品模板備用。

3.反應體系配置：按照先達基因支原檢測試劑盒說明書配置反應體系，並注意做陽性對照和陰性對照。

4.上機檢測：將配好的反應體系放在熒光定量檢測儀中，37℃條件下反應20分鐘後判讀結果。結果判斷：陰性質控反應孔的熒光曲線為水平線， 陽性質控反應孔的熒光曲線呈指數上揚。