廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種型別:
1. 外參法+終產物分析 所謂“外參法”是指樣本與陽性參照在兩個反應容器內反應。這種型別沒有對樣本進行質控監測,易出現假陰假陽結果,沒有監測擴增效率,定量不準。
2. 內參法+終產物分析 所謂“內參法”是指樣本與陽性參照在一個反應容器內反應。這種型別對樣本進行質控監測,排除假陰結果,但是定量不準。
3. 外標法+過程監測 這種型別監測擴增效率,陽性樣本定量準,但是無法排除假陰結果。
4. 內參法+過程監測 由於樣本與陽性參照在一個容器內反應,用同樣的Taq酶和反應參與物,存在競爭性抑制,起始模板量濃度高的反應會抑制起始模板量濃度低的反應,所以定量不準。
5. 外標法+過程監測+內對照 這種型別監測擴增效率,陽性樣本定量準,同時排除假陰結果。這種型別是應該提倡的。 PCR過程的監測有多種檢測模式。最常用的有三種檢測模式,見下面檢測模式的內容。 狹義概念的定量PCR技術(嚴格意義的定量PCR技術)是指用外標法(熒光雜交探針保證特異性)透過監測PCR過程(監測擴增效率)達到精確定量起始模板數的目的,同時以內對照有效排除假陰性結果(擴增效率為零)。在國家沒有出臺陰陽判定標準時,所用PCR系統靈敏度最好達到一個複製(一個病毒)。從理論上說,只要有一個複製數,樣本就算陽性;一個複製數都沒有才算陰性。
廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種型別:
1. 外參法+終產物分析 所謂“外參法”是指樣本與陽性參照在兩個反應容器內反應。這種型別沒有對樣本進行質控監測,易出現假陰假陽結果,沒有監測擴增效率,定量不準。
2. 內參法+終產物分析 所謂“內參法”是指樣本與陽性參照在一個反應容器內反應。這種型別對樣本進行質控監測,排除假陰結果,但是定量不準。
3. 外標法+過程監測 這種型別監測擴增效率,陽性樣本定量準,但是無法排除假陰結果。
4. 內參法+過程監測 由於樣本與陽性參照在一個容器內反應,用同樣的Taq酶和反應參與物,存在競爭性抑制,起始模板量濃度高的反應會抑制起始模板量濃度低的反應,所以定量不準。
5. 外標法+過程監測+內對照 這種型別監測擴增效率,陽性樣本定量準,同時排除假陰結果。這種型別是應該提倡的。 PCR過程的監測有多種檢測模式。最常用的有三種檢測模式,見下面檢測模式的內容。 狹義概念的定量PCR技術(嚴格意義的定量PCR技術)是指用外標法(熒光雜交探針保證特異性)透過監測PCR過程(監測擴增效率)達到精確定量起始模板數的目的,同時以內對照有效排除假陰性結果(擴增效率為零)。在國家沒有出臺陰陽判定標準時,所用PCR系統靈敏度最好達到一個複製(一個病毒)。從理論上說,只要有一個複製數,樣本就算陽性;一個複製數都沒有才算陰性。