基因組汙染產生比目的擴增產物更大的產物，原因是包含了兩段外顯子中間的內含子，要想判斷雜帶是否為基因組汙染引起，只需將外顯子+內含子是否=雜帶分子量或者借用無基因組汙染的cDNA模板擴增跑電泳（done）2、qPCR擴增時，引物擴增效率預設為2，當引物擴增效率低時（表現為pcr擴增電泳條帶亮度低），會影響結果上下調判斷，可以透過稀釋5個梯度，製作校正曲線來校正。3、RNA提取有基因組汙染，會影響qPCR結果嗎？如何影響？如何去除基因組汙染（done）所謂的跨內含子引物，故名思意就是這一對引物跨過一個內含子，我們知道真核生物基因組上的基因是有內含子和外顯子組成的，而外顯子被內含子說分隔開，但是內含子是不轉錄成mRNA的。這就是真核細胞內DNA和mRNA的區別，而我們一般用於檢測目標基因轉錄水平時，使用RT-PCR或者realtimePCR，常常需要針對基因設計一對對的引物，一般來講，在提取RNA的過程中，會帶有基因組DNA的汙染，所以，對於原核生物必須經過DNase酶消化去除DNA，而真核生物由於內含子的存在，我們可以設計引物分別在相鄰的兩個外顯子上，這樣DNA因為引物中間加了一個很大的內含子，而常常無法P出條帶或者預計大小的條帶，而RNA反轉錄後的目的條帶是我們預期的，這樣就可以免去DNA消化的步驟，透過設計這種跨內含子的引物來排除DNA的干擾，但是，並不是每個基因都能找到合適的引物在相鄰的且大小合適的外顯子上，所以，經常也會在一個外顯子上設計引物，這時候就需要完全消化DNA才能得到可靠的結果4、axygen品牌的槍頭和EP管有無滅酶？（done均滅酶）5、如果引物設計跨越了內含子，是否可以忽略?基因組汙染？（done）1）每個引物本身在兩個不同的引物上引物若跨內含子的話，引物僅能以3"端的一小部分結合基因組DNA，這樣的話Tm會很低。在較高的退火溫度下，引物幾乎無法和基因組DNA結合來引發聚合，而主要是與能夠完全配對的cDNA結合並引發反應。2）上下引物，分別位於兩個不同的外顯子上從cDNA和基因組擴增出來的片段大小不同，從而可以透過用合適的延伸時間來限制基因組中大片段的擴增，消除基因組的DNA汙染。
基因組汙染產生比目的擴增產物更大的產物，原因是包含了兩段外顯子中間的內含子，要想判斷雜帶是否為基因組汙染引起，只需將外顯子+內含子是否=雜帶分子量或者借用無基因組汙染的cDNA模板擴增跑電泳（done）2、qPCR擴增時，引物擴增效率預設為2，當引物擴增效率低時（表現為pcr擴增電泳條帶亮度低），會影響結果上下調判斷，可以透過稀釋5個梯度，製作校正曲線來校正。3、RNA提取有基因組汙染，會影響qPCR結果嗎？如何影響？如何去除基因組汙染（done）所謂的跨內含子引物，故名思意就是這一對引物跨過一個內含子，我們知道真核生物基因組上的基因是有內含子和外顯子組成的，而外顯子被內含子說分隔開，但是內含子是不轉錄成mRNA的。這就是真核細胞內DNA和mRNA的區別，而我們一般用於檢測目標基因轉錄水平時，使用RT-PCR或者realtimePCR，常常需要針對基因設計一對對的引物，一般來講，在提取RNA的過程中，會帶有基因組DNA的汙染，所以，對於原核生物必須經過DNase酶消化去除DNA，而真核生物由於內含子的存在，我們可以設計引物分別在相鄰的兩個外顯子上，這樣DNA因為引物中間加了一個很大的內含子，而常常無法P出條帶或者預計大小的條帶，而RNA反轉錄後的目的條帶是我們預期的，這樣就可以免去DNA消化的步驟，透過設計這種跨內含子的引物來排除DNA的干擾，但是，並不是每個基因都能找到合適的引物在相鄰的且大小合適的外顯子上，所以，經常也會在一個外顯子上設計引物，這時候就需要完全消化DNA才能得到可靠的結果4、axygen品牌的槍頭和EP管有無滅酶？（done均滅酶）5、如果引物設計跨越了內含子，是否可以忽略?基因組汙染？（done）1）每個引物本身在兩個不同的引物上引物若跨內含子的話，引物僅能以3"端的一小部分結合基因組DNA，這樣的話Tm會很低。在較高的退火溫度下，引物幾乎無法和基因組DNA結合來引發聚合，而主要是與能夠完全配對的cDNA結合並引發反應。2）上下引物，分別位於兩個不同的外顯子上從cDNA和基因組擴增出來的片段大小不同，從而可以透過用合適的延伸時間來限制基因組中大片段的擴增，消除基因組的DNA汙染。