自動生化分析儀有多種分類方法,最常用的是按其反應裝置的結構進行分類。按此法可將自動生化分析儀分為流動式和分立式兩大類。
流動式自動生化分析儀是指測定專案相同的各待測樣品與試劑混合後的化學反應在同一管道流動的過程中完成。這是第一代自動生化分析儀。過去說得多少通道的生化分析儀指的就是這一類。存在較嚴重的交叉汙染,結果不太準確,現已淘汰。
分立式自動生化分析儀與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的,不易出現交叉汙染,結果可靠。 空氣分段系統
這種分析儀的特點是透過比例定量泵擠壓彈性樣品管、空氣管和試劑管(通稱“泵管”),將樣品依次連續地吸入並沿樣品管輸送,另一方面由空氣管吸入的氣泡將由同樣原理吸入並在試劑管道中連續流動的試劑分成均勻的節段,樣品流和試劑流在連續向前流動的過程中相遇、混合、透吸(必要時)、保溫、反應及被測定。整個分析過程是液流在管道中連續流動的過程中完成的。
非分段系統
非分段系統是靠試劑空白或緩衝液來間隔每個樣品的反應液,這樣,在管道中連續流動的液體不被分段。非分段系統可再分為流動注入系統和間隙系統。
1、流動注入系統:該系統的組成與空氣分段系統相似,但某些結構和工作原理有所不同,空氣分段系統是利用氣泡分段來防止管道中各反應液在流動過程中的交叉汙染,而流動注入系統則是透過將樣品依次注入連續流動的試劑流管道中來達到防止交叉汙染的目的的。
2、間隙系統:該系統的結構、組成和工作原理與流動注入系統相似,但其特點是每一次進樣都必須在前一樣品的分析過程結束後(包括管道的清洗)才能開始,而不能連續地依次進樣,每次進樣間有一時間間隙,故有人稱為不連續流動式分析儀。 分立式為第二代自動生化分析儀,它與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的。
稱為第三代自動生化分析儀的離心式自動生化分析儀,也應屬於分立式。因為在離心式分析儀中,每個待測樣品都是在離心力作用下,在各自的反應槽內與試劑混合,並完成化學反應,繼而被測定的。離心式分析儀屬於“同步分析”,在離心力的作用下,各待測樣品幾乎同時與試劑混合、反應並被測定後打出報告;而其它分析儀是“順序分析”,即各待測樣品依次與試劑混合、反應先後被測定。
袋式自動生化分析儀也應屬於分立式,它是用試劑袋代替反應管和比色皿,測定時每個待測樣品在各自的試劑袋內進行反應並被檢測。還有一種稱為“乾式自動生化分析儀”也屬於分立式。它的主要特點是採用固相化學技術,即將試劑固相於膠片或濾紙小片等載體上。測定時使一定量的待測樣品分佈於一張試紙片上,一定時間後用反射光度計測定。
分立式自動生化分析儀,是目前各實驗室普遍使用的自動生化分析儀,一般都可以任意選擇測定專案,故稱為任選式自動生化分析儀。下面將重點介紹任選式自動生化分析儀。 加樣系統
1、樣品轉盤:可放置小型樣品杯數十隻。有的分析儀可直接用盛樣本的試管,有的還附有條形碼閱讀裝置,能識別樣本試管上的條形碼資訊,不需給樣本編號,也不必輸入病人資料即可打印出該病人的化驗報告。
2、試劑室(倉):不同的分析儀試劑室可容納的試劑盒數量不同,一般可容納20多種試劑。有的試劑室帶有冷藏裝置,帶有條形碼識別裝置的試劑室試劑可以任意放置試劑盒位置。
3、取樣裝置:有的分析儀取樣本和取試劑公用同一取樣針,由內部的分流閥控制取樣本和取試劑;有的儀器有兩套取樣裝置,分別取樣本和取試劑。取樣針前端有液麵感測器防止空吸或採樣針外壁液體掛淋,取樣臂中有預溫裝置。如果採用多試劑分析方法,將佔用試劑室中試劑盒位置,會減少測定專案。
樣本系統
1、樣本庫:有65個樣本位,可放置多種原始採血管、試管及微量樣本杯。並有兩個樣本盤,可任意交換使用。
2、樣本量:2.5ul~40ul,專案編制時確定,儀器自動取樣,0.05ul遞增。
3、樣本針:具有液麵自動檢測和防碰撞安全保護功能。
4、樣本針清洗:除專用的清洗液對樣本針的內外表面沖洗外,還用溫的蒸餾水沖洗樣品針的外表面,熱風吹乾。
作業系統
1、軟體作業系統:Windows XP
2、資料處理:儲存,輸出各種檢測資料和圖表(包括專案的計算結果)沒有時間和儲存量的限制。
比色系統
1、光源:大多數分析儀使用鹵素鎢絲燈,工作波長325~800nm。有的分析儀使用氙燈,工作波長285~750nm。
2、比色杯:有分立式比色杯、分立式轉盤式比色杯、離心式比色盤、流動池。乾式生化儀不需要比色杯,袋式生化儀由試劑袋經擠壓自動形成比色杯。比色杯光徑6-7mm,少數為10mm。
比色杯中的反應液需要恆溫,有37℃、30℃、25℃三檔可選擇,有的固定為37℃。多數用吹入恆溫空氣的方式,也有用恆溫水浴或半導體溫控裝置的。
為了保證比色杯中反應液有±0.1℃的精確度,分析儀的環境溫度必需保持18~30℃,室溫波動不宜超過2℃。
3、單色器:(1)干涉濾光片(2)光柵
4、檢測器:(1)光電倍增管,已很少用。(2)列陣固態光敏二極體。
供排水系統
自動生化分析儀中有很多供水管道與電磁閥。只讀儲存器中軟體引數控制電磁閥與輸液泵供給各個部件的沖洗與吸液,最後排出機外。隨機儲存器內的分析引數控制電磁閥與注射器的步進電機,供應樣本、試劑和稀釋用水。有的生化儀還能自動沖洗比色杯供反覆使用。
資料處理系統
每個專案的檢測結果暫時儲存在隨機儲存器中,待某個樣本所需的專案全部檢測完畢,由微機彙總打印出綜合報告單。微機的儲存器中可以儲存相當數量的病人資料與逐日的室內質控資料,隨時可以按指令調出,在熒光屏上顯示或列印,也可儲存在軟盤中長期儲存,隨時調閱。
分析順序
每份樣品可以任選試劑室內預置試劑盒的一項或全部專案的檢測。微機按輸入的指令,安排專案檢測次序,一般先做孵育時間長的終點法,後做監測時間短的速率法,以便恆速列印綜合報告單。當指定樣本進入待測位置時,微機指令試劑盒進入試劑取樣位置,按所測專案的引數由加樣系統定量取樣,同時比色杯按微機的指令到達指定位置加樣。生化儀的分析速度與儀器加樣週期的時間有關。加樣週期的時間越短分析儀的速度越快。雙試劑法佔用兩個加樣週期,分析速度減半。
分析引數
1、試驗代號 14、連續監測時間
2、試驗名稱 15、標準液數量
3、試驗方法 16、標準液濃度
4、試驗型別 17、重複校標次數
5、溫度 18、計算因子(F值)
6、波長:可選擇主波長和次波長。 19、計量單位
7、反應型別 20、小數點位數
8、終點法零點讀數 21、底物耗盡
9、樣本量與稀釋水量 22、線性度
10、試劑量與稀釋水量 23、試劑吸光度上限與下限
11、樣本空白 24、線性範圍
12、孵育時間 25、參考範圍
13、延遲時間
分析引數的使用
(一)儀器廠家提供的測定專案
1、著名儀器公司自己生產常用專案試劑盒、定標液(定值血清型標準液)與定值質控血清,提供30種左右常用專案的分析引數,供使用者直接使用。另外還有數十個空白專案引數表,由使用者自己開發新專案。
2、有的著名儀器公司自己不提供試劑盒,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析引數。因此,在購買儀器時必須購買一定數量指定試劑公司的試劑盒(包括定標液與定值質控血清)。
3、小型儀器公司既不生產試劑盒,也沒有合作試劑公司,分析引數表是空的,需要使用者自己設計分析引數,因此難度很大。不過國內代理商一般提供他們的設計引數,往往個別引數不恰當,使用者自己應逐條核實。
(二)最好使用廠家的原裝引數
1、原裝分析引數不應修改,僅計量單位要選用中國法定單位。用原公司指定的試劑盒、定標液與定值質控血清作室內質量控制,除非分析儀沒有除錯好或有故障,一般能一次透過。
2、不同公司的定標液在定值時所用原始標準的來源不同,其定值可以稍有差異。方法學相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標液或用水劑標準液作儀器定標,使用非指定試劑盒作質控,測得的數值與質控血清的的預計值會有差異,這種情況不表示原裝分析引數不合適。
3、中國產試劑盒的產品質量已大有提高,可選擇方法學相同的優質中國產試劑盒與原公司指定試劑盒作並行檢測,實驗樣品應包括低值和高值,結果作相關分析。符合要求的可以使用。少數專案的方法學沒有符合要求的中國產試劑盒,只有另行安排該專案的中國產試劑分析引數。但原引數要保留或備份,等待合格的中國產試劑盒出現。
4、不論用原公司或中國產試劑盒,原分析引數不應隨意修改,尤其是主要引數;如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時間、延遲時間、檢測時間,因為這些引數一旦改變,線性範圍和各種限額引數都將發生改變,嚴重影響測定結果的準確性。
5、雙試劑兩步法的方法學有很多優點,如果分析儀為雙試劑式,最好用雙試劑兩步法。
6、底物耗盡引數不能刪去,否則高濃度結果出現低值;線性範圍如果刪去,高濃度結果也會偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變質試劑。
(三)自己設計分析引數的原則
如果儀器公司不提供分析引數或測定專案的方法學不同,可以自己設定分析引數。主要設計以下幾個引數。
1、樣本試劑比例。 6、計算因子。
2、孵育時間。 7、底物耗盡限額。
3、延遲時間。 8、線性度。
4、監測時間。 9、線性範圍。
5、試劑吸光度上下限。
以上這些引數試劑盒說明書一般都會提供,可按此填入分析引數表,定標後即可進行日常工作,有些引數在以後的工作中逐步修正。
自動生化分析儀有多種分類方法,最常用的是按其反應裝置的結構進行分類。按此法可將自動生化分析儀分為流動式和分立式兩大類。
流動式自動生化分析儀是指測定專案相同的各待測樣品與試劑混合後的化學反應在同一管道流動的過程中完成。這是第一代自動生化分析儀。過去說得多少通道的生化分析儀指的就是這一類。存在較嚴重的交叉汙染,結果不太準確,現已淘汰。
分立式自動生化分析儀與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的,不易出現交叉汙染,結果可靠。 空氣分段系統
這種分析儀的特點是透過比例定量泵擠壓彈性樣品管、空氣管和試劑管(通稱“泵管”),將樣品依次連續地吸入並沿樣品管輸送,另一方面由空氣管吸入的氣泡將由同樣原理吸入並在試劑管道中連續流動的試劑分成均勻的節段,樣品流和試劑流在連續向前流動的過程中相遇、混合、透吸(必要時)、保溫、反應及被測定。整個分析過程是液流在管道中連續流動的過程中完成的。
非分段系統
非分段系統是靠試劑空白或緩衝液來間隔每個樣品的反應液,這樣,在管道中連續流動的液體不被分段。非分段系統可再分為流動注入系統和間隙系統。
1、流動注入系統:該系統的組成與空氣分段系統相似,但某些結構和工作原理有所不同,空氣分段系統是利用氣泡分段來防止管道中各反應液在流動過程中的交叉汙染,而流動注入系統則是透過將樣品依次注入連續流動的試劑流管道中來達到防止交叉汙染的目的的。
2、間隙系統:該系統的結構、組成和工作原理與流動注入系統相似,但其特點是每一次進樣都必須在前一樣品的分析過程結束後(包括管道的清洗)才能開始,而不能連續地依次進樣,每次進樣間有一時間間隙,故有人稱為不連續流動式分析儀。 分立式為第二代自動生化分析儀,它與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的。
稱為第三代自動生化分析儀的離心式自動生化分析儀,也應屬於分立式。因為在離心式分析儀中,每個待測樣品都是在離心力作用下,在各自的反應槽內與試劑混合,並完成化學反應,繼而被測定的。離心式分析儀屬於“同步分析”,在離心力的作用下,各待測樣品幾乎同時與試劑混合、反應並被測定後打出報告;而其它分析儀是“順序分析”,即各待測樣品依次與試劑混合、反應先後被測定。
袋式自動生化分析儀也應屬於分立式,它是用試劑袋代替反應管和比色皿,測定時每個待測樣品在各自的試劑袋內進行反應並被檢測。還有一種稱為“乾式自動生化分析儀”也屬於分立式。它的主要特點是採用固相化學技術,即將試劑固相於膠片或濾紙小片等載體上。測定時使一定量的待測樣品分佈於一張試紙片上,一定時間後用反射光度計測定。
分立式自動生化分析儀,是目前各實驗室普遍使用的自動生化分析儀,一般都可以任意選擇測定專案,故稱為任選式自動生化分析儀。下面將重點介紹任選式自動生化分析儀。 加樣系統
1、樣品轉盤:可放置小型樣品杯數十隻。有的分析儀可直接用盛樣本的試管,有的還附有條形碼閱讀裝置,能識別樣本試管上的條形碼資訊,不需給樣本編號,也不必輸入病人資料即可打印出該病人的化驗報告。
2、試劑室(倉):不同的分析儀試劑室可容納的試劑盒數量不同,一般可容納20多種試劑。有的試劑室帶有冷藏裝置,帶有條形碼識別裝置的試劑室試劑可以任意放置試劑盒位置。
3、取樣裝置:有的分析儀取樣本和取試劑公用同一取樣針,由內部的分流閥控制取樣本和取試劑;有的儀器有兩套取樣裝置,分別取樣本和取試劑。取樣針前端有液麵感測器防止空吸或採樣針外壁液體掛淋,取樣臂中有預溫裝置。如果採用多試劑分析方法,將佔用試劑室中試劑盒位置,會減少測定專案。
樣本系統
1、樣本庫:有65個樣本位,可放置多種原始採血管、試管及微量樣本杯。並有兩個樣本盤,可任意交換使用。
2、樣本量:2.5ul~40ul,專案編制時確定,儀器自動取樣,0.05ul遞增。
3、樣本針:具有液麵自動檢測和防碰撞安全保護功能。
4、樣本針清洗:除專用的清洗液對樣本針的內外表面沖洗外,還用溫的蒸餾水沖洗樣品針的外表面,熱風吹乾。
作業系統
1、軟體作業系統:Windows XP
2、資料處理:儲存,輸出各種檢測資料和圖表(包括專案的計算結果)沒有時間和儲存量的限制。
比色系統
1、光源:大多數分析儀使用鹵素鎢絲燈,工作波長325~800nm。有的分析儀使用氙燈,工作波長285~750nm。
2、比色杯:有分立式比色杯、分立式轉盤式比色杯、離心式比色盤、流動池。乾式生化儀不需要比色杯,袋式生化儀由試劑袋經擠壓自動形成比色杯。比色杯光徑6-7mm,少數為10mm。
比色杯中的反應液需要恆溫,有37℃、30℃、25℃三檔可選擇,有的固定為37℃。多數用吹入恆溫空氣的方式,也有用恆溫水浴或半導體溫控裝置的。
為了保證比色杯中反應液有±0.1℃的精確度,分析儀的環境溫度必需保持18~30℃,室溫波動不宜超過2℃。
3、單色器:(1)干涉濾光片(2)光柵
4、檢測器:(1)光電倍增管,已很少用。(2)列陣固態光敏二極體。
供排水系統
自動生化分析儀中有很多供水管道與電磁閥。只讀儲存器中軟體引數控制電磁閥與輸液泵供給各個部件的沖洗與吸液,最後排出機外。隨機儲存器內的分析引數控制電磁閥與注射器的步進電機,供應樣本、試劑和稀釋用水。有的生化儀還能自動沖洗比色杯供反覆使用。
資料處理系統
每個專案的檢測結果暫時儲存在隨機儲存器中,待某個樣本所需的專案全部檢測完畢,由微機彙總打印出綜合報告單。微機的儲存器中可以儲存相當數量的病人資料與逐日的室內質控資料,隨時可以按指令調出,在熒光屏上顯示或列印,也可儲存在軟盤中長期儲存,隨時調閱。
分析順序
每份樣品可以任選試劑室內預置試劑盒的一項或全部專案的檢測。微機按輸入的指令,安排專案檢測次序,一般先做孵育時間長的終點法,後做監測時間短的速率法,以便恆速列印綜合報告單。當指定樣本進入待測位置時,微機指令試劑盒進入試劑取樣位置,按所測專案的引數由加樣系統定量取樣,同時比色杯按微機的指令到達指定位置加樣。生化儀的分析速度與儀器加樣週期的時間有關。加樣週期的時間越短分析儀的速度越快。雙試劑法佔用兩個加樣週期,分析速度減半。
分析引數
1、試驗代號 14、連續監測時間
2、試驗名稱 15、標準液數量
3、試驗方法 16、標準液濃度
4、試驗型別 17、重複校標次數
5、溫度 18、計算因子(F值)
6、波長:可選擇主波長和次波長。 19、計量單位
7、反應型別 20、小數點位數
8、終點法零點讀數 21、底物耗盡
9、樣本量與稀釋水量 22、線性度
10、試劑量與稀釋水量 23、試劑吸光度上限與下限
11、樣本空白 24、線性範圍
12、孵育時間 25、參考範圍
13、延遲時間
分析引數的使用
(一)儀器廠家提供的測定專案
1、著名儀器公司自己生產常用專案試劑盒、定標液(定值血清型標準液)與定值質控血清,提供30種左右常用專案的分析引數,供使用者直接使用。另外還有數十個空白專案引數表,由使用者自己開發新專案。
2、有的著名儀器公司自己不提供試劑盒,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析引數。因此,在購買儀器時必須購買一定數量指定試劑公司的試劑盒(包括定標液與定值質控血清)。
3、小型儀器公司既不生產試劑盒,也沒有合作試劑公司,分析引數表是空的,需要使用者自己設計分析引數,因此難度很大。不過國內代理商一般提供他們的設計引數,往往個別引數不恰當,使用者自己應逐條核實。
(二)最好使用廠家的原裝引數
1、原裝分析引數不應修改,僅計量單位要選用中國法定單位。用原公司指定的試劑盒、定標液與定值質控血清作室內質量控制,除非分析儀沒有除錯好或有故障,一般能一次透過。
2、不同公司的定標液在定值時所用原始標準的來源不同,其定值可以稍有差異。方法學相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標液或用水劑標準液作儀器定標,使用非指定試劑盒作質控,測得的數值與質控血清的的預計值會有差異,這種情況不表示原裝分析引數不合適。
3、中國產試劑盒的產品質量已大有提高,可選擇方法學相同的優質中國產試劑盒與原公司指定試劑盒作並行檢測,實驗樣品應包括低值和高值,結果作相關分析。符合要求的可以使用。少數專案的方法學沒有符合要求的中國產試劑盒,只有另行安排該專案的中國產試劑分析引數。但原引數要保留或備份,等待合格的中國產試劑盒出現。
4、不論用原公司或中國產試劑盒,原分析引數不應隨意修改,尤其是主要引數;如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時間、延遲時間、檢測時間,因為這些引數一旦改變,線性範圍和各種限額引數都將發生改變,嚴重影響測定結果的準確性。
5、雙試劑兩步法的方法學有很多優點,如果分析儀為雙試劑式,最好用雙試劑兩步法。
6、底物耗盡引數不能刪去,否則高濃度結果出現低值;線性範圍如果刪去,高濃度結果也會偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變質試劑。
(三)自己設計分析引數的原則
如果儀器公司不提供分析引數或測定專案的方法學不同,可以自己設定分析引數。主要設計以下幾個引數。
1、樣本試劑比例。 6、計算因子。
2、孵育時間。 7、底物耗盡限額。
3、延遲時間。 8、線性度。
4、監測時間。 9、線性範圍。
5、試劑吸光度上下限。
以上這些引數試劑盒說明書一般都會提供,可按此填入分析引數表,定標後即可進行日常工作,有些引數在以後的工作中逐步修正。