先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
（2） 緩衝液：
1） 緩衝液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩衝液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用，使 pH 恆定。
2） 緩衝液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O（ 新鮮 ） 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌汙染，如有汙染則應報廢。
先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
（2） 緩衝液：
1） 緩衝液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩衝液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用，使 pH 恆定。
2） 緩衝液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O（ 新鮮 ） 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌汙染，如有汙染則應報廢。