1、操作前應將本次操作所需的全部物品移入安全櫃，避免雙臂頻繁穿過氣幕破壞氣流；並且在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，以去除汙染。

2、開啟風機5～10分鐘，待櫃內空氣淨化並氣流穩定後再進行實驗操作。將雙臂緩緩伸入安全櫃內，至少靜止1分鐘，使櫃內氣流穩定後再進行操作。

3、生物安全櫃內不放與本次實驗無關的物品。櫃內物品擺放應做到清潔區、半汙染區與汙染區基本分開，操作過程中物品取用方便，且三區之間無交叉。物品應儘量靠後放置，但不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動。

4、操作時應按照從清潔區到汙染區進行，以避免交叉汙染。為防可能濺出的液滴，可在臺面上鋪一用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全櫃格柵。

5、櫃內操作期間，嚴禁使用酒精燈等明火，以避免產生的熱量產生氣流，干擾櫃內氣流穩定；且明火可能損壞HEPA濾器。

6、工作時儘量減少背後人員走動以及快速開關房門，以防止安全櫃內氣流不穩定。

7、在實驗操作時，不可開啟玻璃視窗，應保證操作者臉部在工作視窗之上。在櫃內操作時動作應輕柔、舒緩，防止影響櫃內氣流。

8、安全櫃應定期進行檢測與保養，以保證其正常工作。工作中一旦發現安全櫃工作異常，應立即停止工作，採取相應處理措施，並通知相關人員。

9、工作完全後，關閉玻璃窗，保持風機繼續運轉10～15分鐘，同時開啟紫外燈，照射30分鐘。

10、安全櫃應定期進行清潔消毒，櫃內檯面汙染物可在工作完成且紫外燈消毒後用2%的84消毒液擦拭。櫃體外表面則應每天用1%的84消毒液擦拭。

11、櫃內使用的物品應在消毒後再取出，以防止將病原微生物帶出而汙染環境。