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  • 1 # 漏光是想想而已

    RNA與DNA的鑑定需要水浴加熱。30度水浴保溫5min作用為配合鹽酸水解,鹽酸濃度,水浴溫度和保溫時間都會影響水解效果,如水解度過低會影響後面染色效果,解度過高則會嚴重破壞細胞結構,干擾DNA和RNA觀察DNA的鑑定(1)配製二苯胺試劑:取0.1 mL B液;滴入到10 mL A液中,混勻.(2)鑑定:取4 mL DNA提取液放入試管中,加入4 mL二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍).用沸水浴(100℃)加熱10 min.在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色).附1:研磨液的配製方法Tris:10.1 g(相對分子質量為121.4),先加50 mL蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 mol/L的鹽酸調至pH=8.0,再加下述藥品.NaCl:8.76 g(相對分子質量58.44)EDTA:37.2 g(相對分子質量372.24)SDS:20 g(相對分子質量288.3)待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定溶至1000 mL.若在室溫低於20℃時配製藥液,SDS呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將SDS溶解.如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用.附2:研磨液中幾種藥品的作用SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與DNA分離.EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後DNA酶降解DNA.物質的量濃度為0.15 mol/L的氯化鈉溶液:能很好地溶解DNA.Tris/HCl:提供緩衝體系,DNA在這個緩衝體系中呈穩定狀態.(Tris為三羥甲基氨基甲烷)RNA的鑑定取RNA沉澱約O.2 g,加2 ml 10%H2SO4→沸水浴中加熱2 min→加1.5 ml地衣酚試劑→沸水浴中加熱→觀察顏色變化。

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