一句話:16S rRNA序列在進化上是保守的,通常用來鑑定細菌等原核生物,並可進行進化分析。 詳細的:16s rRNA廣泛存在於原核生物的細胞中,其分子長度約為1.5kb左右。 相比其他分子,16S rRNA既保證了較大的資訊量(如5S rRNA太短, 包含資訊量太少)又便於擴增和測序(23S rRNA較長,測序時比較麻煩)。事實上這三種編碼原核生物核糖體RNA的rRNA基因序列在進化上都是保守的,都可以拿來進行進化分析,但基於上述原因一般都用16S rRNA序列。 鑑定細菌到種一般都採用16S rRNA和傳統生化指標相結合的方法 附1: 首先如果你的菌株是自然界中分離得到,就只能鑑定到種,不能鑑定到株,因為多多少少和其他株系的細菌有區別,即便你做了一些特徵的鑑定,發現和某一株細菌一模一樣,你也沒有理由說你的細菌就是那一株細菌,因為你不可能把所有的特徵都做完,株和株之間的關係就相當於不同的人之間的關係,世界上不可能有完全相同的兩個人。除非你知道你的細菌本來就是某一株細菌擴增出來的(而且要保證沒有變異,否則就是一個新株),可是這樣就沒必要鑑定了。 菌種鑑定一般就只要提取基因組DNA,然後PCR擴增16srDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon對比即可。 一般序列相似度在97%以上(也有說法是98%,甚至更高)就可以認為是同種細菌(當然也有例外,DNA序列僅僅是一個參考指標)。 附2:16S rRNA鑑定一般步驟: 一、提取其DNA,利用16SrRNA通用引物PCR擴增出其16SrRNA,取出一半進行跑膠測試純度與大小,一般是1500bp左右,以下稱之為目的基因 二、如果第一步得到的目的基因理想,就將目的基因連線到T載體上,T載體有很多種,隨便哪種都可以,如果一種連線不上就換另一種,應該注意記得所用T載體的分子量大小,一般3000bp左右 三、連線後將整個連線體匯入大腸桿菌細胞感受態細胞(很多實驗書上都有具體步驟) 四、培養感受態細胞16或18小時,提取其質粒,然後將質粒拿出一部分跑膠,看提取情況並看一下分子量是否為16SrRNA和T載體的分子量之和,如果是,則成功 五、酶切所提取的質粒,以得到目的基因,跑膠,如果有目的基因大小的明亮條帶則說明是16SrRNA,拿去測序就可以了
一句話:16S rRNA序列在進化上是保守的,通常用來鑑定細菌等原核生物,並可進行進化分析。 詳細的:16s rRNA廣泛存在於原核生物的細胞中,其分子長度約為1.5kb左右。 相比其他分子,16S rRNA既保證了較大的資訊量(如5S rRNA太短, 包含資訊量太少)又便於擴增和測序(23S rRNA較長,測序時比較麻煩)。事實上這三種編碼原核生物核糖體RNA的rRNA基因序列在進化上都是保守的,都可以拿來進行進化分析,但基於上述原因一般都用16S rRNA序列。 鑑定細菌到種一般都採用16S rRNA和傳統生化指標相結合的方法 附1: 首先如果你的菌株是自然界中分離得到,就只能鑑定到種,不能鑑定到株,因為多多少少和其他株系的細菌有區別,即便你做了一些特徵的鑑定,發現和某一株細菌一模一樣,你也沒有理由說你的細菌就是那一株細菌,因為你不可能把所有的特徵都做完,株和株之間的關係就相當於不同的人之間的關係,世界上不可能有完全相同的兩個人。除非你知道你的細菌本來就是某一株細菌擴增出來的(而且要保證沒有變異,否則就是一個新株),可是這樣就沒必要鑑定了。 菌種鑑定一般就只要提取基因組DNA,然後PCR擴增16srDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon對比即可。 一般序列相似度在97%以上(也有說法是98%,甚至更高)就可以認為是同種細菌(當然也有例外,DNA序列僅僅是一個參考指標)。 附2:16S rRNA鑑定一般步驟: 一、提取其DNA,利用16SrRNA通用引物PCR擴增出其16SrRNA,取出一半進行跑膠測試純度與大小,一般是1500bp左右,以下稱之為目的基因 二、如果第一步得到的目的基因理想,就將目的基因連線到T載體上,T載體有很多種,隨便哪種都可以,如果一種連線不上就換另一種,應該注意記得所用T載體的分子量大小,一般3000bp左右 三、連線後將整個連線體匯入大腸桿菌細胞感受態細胞(很多實驗書上都有具體步驟) 四、培養感受態細胞16或18小時,提取其質粒,然後將質粒拿出一部分跑膠,看提取情況並看一下分子量是否為16SrRNA和T載體的分子量之和,如果是,則成功 五、酶切所提取的質粒,以得到目的基因,跑膠,如果有目的基因大小的明亮條帶則說明是16SrRNA,拿去測序就可以了