【目的要求】：
瞭解：分光光度法測定DNA濃度和純度的原理；
掌握：分光光度法測定DNA濃度和純度的技術方法；
熟悉：分光光度法測定DNA濃度和純度的實驗操作步驟和注意事項。【實驗原理】：
前面提取得到的DNA的濃度和純度都是未知的，在後續的DNA酶切、連線及轉化等實驗中需要一定的濃度和純度要求，因此要測定DNA的濃度和純度。
測定DNA的方法通常有：紫外分光光度法；瓊脂糖凝膠電泳法（也叫熒光光度法）
（1）紫外分光光度法：
組成DNA的鹼基均具有一定的吸收紫外線特性，最大吸收值在波長為250～270nm之間，腺嘌呤的最大紫外線吸收值在260.5nm，胞嘧啶：267nm，鳥嘌呤：276nm，胸腺嘧啶：264.5nm，尿嘧啶：259nm。這些鹼基與戊糖、磷酸形成核苷酸後其最大吸收峰不會改變，但核酸的最大吸收波長是260nm，吸收低谷在230nm。這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。在波長260nm紫外線下，10OD值的光密度相當於雙鏈DNA濃度為50μg/ml；單鏈DNA或RNA為40μg/ml；單鏈寡聚核苷酸為20μg/ml。可以此來計算核酸樣品的濃度。
分光光度法不但能夠確定核酸的濃度，還可以透過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值（A260/A280）估計核酸的純度。DNA的比值為1.8，RNA的比值為2.0。若DNA比值高於1.8，說明製劑中RNA尚未除盡。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。當然也會出現既含蛋白質又含RNA的DNA溶液比值為1.8的情況，所以有必要結合凝膠電泳等方法鑑定有無RNA，或用測定蛋白質的方法檢測是否存在蛋白質。紫外分光光度法只用於測定濃度大於0.25μg/ml的核酸溶液。
（2）瓊脂糖凝膠電泳法（熒光光度法）：
對於很稀的核酸溶液，可以用瓊脂糖凝膠電泳法。溴化乙錠在紫外光照射下能發射熒光，它插入到DNA分子中形成熒光結合物，使發射的熒光增強幾十倍，而熒光的強度正比於DNA的含量，將已知濃度的標準樣品作為電泳對照，就可以估計出待測樣品的濃度。用量只需要5-10ng DNA即可，肉眼觀察可檢測0.05g-0.1g的DNA。該方法只是估計水平，另外還應考慮DNA或RNA樣品中分子大小與標準對照中核酸分子的長度
【目的要求】：
瞭解：分光光度法測定DNA濃度和純度的原理；
掌握：分光光度法測定DNA濃度和純度的技術方法；
熟悉：分光光度法測定DNA濃度和純度的實驗操作步驟和注意事項。【實驗原理】：
前面提取得到的DNA的濃度和純度都是未知的，在後續的DNA酶切、連線及轉化等實驗中需要一定的濃度和純度要求，因此要測定DNA的濃度和純度。
測定DNA的方法通常有：紫外分光光度法；瓊脂糖凝膠電泳法（也叫熒光光度法）
（1）紫外分光光度法：
組成DNA的鹼基均具有一定的吸收紫外線特性，最大吸收值在波長為250～270nm之間，腺嘌呤的最大紫外線吸收值在260.5nm，胞嘧啶：267nm，鳥嘌呤：276nm，胸腺嘧啶：264.5nm，尿嘧啶：259nm。這些鹼基與戊糖、磷酸形成核苷酸後其最大吸收峰不會改變，但核酸的最大吸收波長是260nm，吸收低谷在230nm。這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。在波長260nm紫外線下，10OD值的光密度相當於雙鏈DNA濃度為50μg/ml；單鏈DNA或RNA為40μg/ml；單鏈寡聚核苷酸為20μg/ml。可以此來計算核酸樣品的濃度。
分光光度法不但能夠確定核酸的濃度，還可以透過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值（A260/A280）估計核酸的純度。DNA的比值為1.8，RNA的比值為2.0。若DNA比值高於1.8，說明製劑中RNA尚未除盡。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。當然也會出現既含蛋白質又含RNA的DNA溶液比值為1.8的情況，所以有必要結合凝膠電泳等方法鑑定有無RNA，或用測定蛋白質的方法檢測是否存在蛋白質。紫外分光光度法只用於測定濃度大於0.25μg/ml的核酸溶液。
（2）瓊脂糖凝膠電泳法（熒光光度法）：
對於很稀的核酸溶液，可以用瓊脂糖凝膠電泳法。溴化乙錠在紫外光照射下能發射熒光，它插入到DNA分子中形成熒光結合物，使發射的熒光增強幾十倍，而熒光的強度正比於DNA的含量，將已知濃度的標準樣品作為電泳對照，就可以估計出待測樣品的濃度。用量只需要5-10ng DNA即可，肉眼觀察可檢測0.05g-0.1g的DNA。該方法只是估計水平，另外還應考慮DNA或RNA樣品中分子大小與標準對照中核酸分子的長度