抗體的純化 ( 硫酸銨沉澱法）
一， 基本原理
硫酸銨沉澱法可用於從大量粗製劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉澱出來。各種蛋白質的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉澱不同的蛋白質。這種方法稱之為鹽析。鹽濃度通常用飽和度來表示。硫酸銨因其溶解度大，溫度係數小和不易使蛋白質變性而應用最廣。
二， 試劑及儀器
1 . 組織培養上清液、血清樣品或腹水等
2. 硫酸銨（ NH 4 ） SO 4
3. 飽和硫酸銨溶液（ SAS ）
4. 蒸餾水
5. PBS( 含 0.2g /L 疊氮鈉 )
6. 透析袋
7. 超速離心機
8. pH 計
9. 磁力攪拌器
三， 操作步驟
以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉澱。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。
（一）配製飽和硫酸銨溶液（ SAS ）
1.將 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到硫酸pH7.0 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）.
2.其它不同飽和度銨溶液的配製
（二）沉澱
1.樣品（如腹水） 20 000 ′ g 離心 30 min ，除去細胞碎片；
2.保留上清液並測量體積；
3.邊攪拌邊慢慢加入等體積的 SAS 到上清液中，終濃度為 1 ： 1 （
4.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時或攪拌過夜（ 4 ° C ），使蛋白質充分沉澱。
（三）透析
1.蛋白質溶液 10 000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ）。棄上清保留沉澱；
2.將沉澱溶於少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 疊氮鈉中。沉澱溶解後放入透析袋對
PBS -0.2g /L 疊氮鈉透析 24-48 小時（ 4 ° C ），每隔 3-6 小時換透析緩衝液一次，以徹底除去硫酸氨；
3.透析液離心，測定上清液中蛋白質含量。
四，應用提示
（一） 先用較低濃度的硫酸氨預沉澱，除去樣品中的雜蛋白。
1.邊攪拌邊慢慢加 SAS 到樣品溶液中，使濃度為 0.5:1 (v/v) ；
2.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時 或過夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；
4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；
5.雜蛋白與欲純化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差別很大時，用預沉澱除雜蛋白是非常有效
（二）為避免體積過大，可用固體硫酸氨進行鹽析（硫酸氨用量參考表 1 ）；硫酸氨沉澱法與層析 技術結合使用，可得到更進一步純化的抗體。
抗體的純化 ( 硫酸銨沉澱法）
一， 基本原理
硫酸銨沉澱法可用於從大量粗製劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉澱出來。各種蛋白質的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉澱不同的蛋白質。這種方法稱之為鹽析。鹽濃度通常用飽和度來表示。硫酸銨因其溶解度大，溫度係數小和不易使蛋白質變性而應用最廣。
二， 試劑及儀器
1 . 組織培養上清液、血清樣品或腹水等
2. 硫酸銨（ NH 4 ） SO 4
3. 飽和硫酸銨溶液（ SAS ）
4. 蒸餾水
5. PBS( 含 0.2g /L 疊氮鈉 )
6. 透析袋
7. 超速離心機
8. pH 計
9. 磁力攪拌器
三， 操作步驟
以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉澱。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。
（一）配製飽和硫酸銨溶液（ SAS ）
1.將 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到硫酸pH7.0 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）.
2.其它不同飽和度銨溶液的配製
（二）沉澱
1.樣品（如腹水） 20 000 ′ g 離心 30 min ，除去細胞碎片；
2.保留上清液並測量體積；
3.邊攪拌邊慢慢加入等體積的 SAS 到上清液中，終濃度為 1 ： 1 （
4.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時或攪拌過夜（ 4 ° C ），使蛋白質充分沉澱。
（三）透析
1.蛋白質溶液 10 000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ）。棄上清保留沉澱；
2.將沉澱溶於少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 疊氮鈉中。沉澱溶解後放入透析袋對
PBS -0.2g /L 疊氮鈉透析 24-48 小時（ 4 ° C ），每隔 3-6 小時換透析緩衝液一次，以徹底除去硫酸氨；
3.透析液離心，測定上清液中蛋白質含量。
四，應用提示
（一） 先用較低濃度的硫酸氨預沉澱，除去樣品中的雜蛋白。
1.邊攪拌邊慢慢加 SAS 到樣品溶液中，使濃度為 0.5:1 (v/v) ；
2.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時 或過夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；
4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；
5.雜蛋白與欲純化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差別很大時，用預沉澱除雜蛋白是非常有效
（二）為避免體積過大，可用固體硫酸氨進行鹽析（硫酸氨用量參考表 1 ）；硫酸氨沉澱法與層析 技術結合使用，可得到更進一步純化的抗體。