1、常用玻璃儀器的準備 製備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗乾淨,晾乾後備用.（1）平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內,於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾,備用.（2）試管管口用棉花塞或矽氟塑膠試管塞塞好,再用布或報紙包紮好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾,備用.（3）吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端（防止汙染物吸出,或橡皮帽內的氣體汙染）,然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內,於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾,備用.其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後,備用.2、培養基的製備及儲存 （1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內.加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經常攪拌,防止焦結,待其溶解後補足水分.在使用乾燥培養基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然後稱取一定量培養基幹粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振盪,或延長時間以促進溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養成分被破壞.（2）校正酸鹼度（調節pH）：培養基必須有適當的pH.因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一,測定pH的標準溫度為25士2℃.調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當調節緩衝液的pH時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右,滅菌後基本合適.因此對培養基、緩衝液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定,並記下每次pH的測定結果,有助於積累資料考察每種培養基、緩衝液、試劑對滅菌程式的耐受性,從而指導滅菌前pH的調節.乾燥培養基一般已校正過pH,用時也必須再驗證.測定時,一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化,或用pH計校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或鹼液加以校正.調整pH後要加熱過濾,使培養基澄清.（3）培養基的分裝：大批次配製時使用的自動分配器須經校準和確認.每次使用前後,均要對分配器的管道系統進行沖洗,在分裝無菌培養基前,則要採用無菌矽膠管.固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管.平皿：傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑膠平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min.讓水蒸汽自然蒸發.斜面：製備低層斜面分裝於試管,約佔容積1/5,滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木杆上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基,如沾有培養基應用布抹去,以避免汙染.高層斜面：製備高層斜面分裝於試管,約佔試管容積的1/3,滅菌後趁熱放置成高層短斜面,待其凝固後應用.分裝好的培養基或緩衝液等及時密封后必須在配製當天（2h內最佳）進行滅菌處理.液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基,滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中.培養基的滅菌：培養基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定.普通培養基採用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應延長至20min.含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續3d,間歇滅菌.血清或組織液,採用低熱56—58水浴1h,連續5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等,可用細菌過濾器,過濾除菌.高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內的空氣,再逐漸升壓保持預定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物.以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認,如不同型別培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kPa滅菌30min為好.
1、常用玻璃儀器的準備 製備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗乾淨,晾乾後備用.（1）平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內,於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾,備用.（2）試管管口用棉花塞或矽氟塑膠試管塞塞好,再用布或報紙包紮好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾,備用.（3）吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端（防止汙染物吸出,或橡皮帽內的氣體汙染）,然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內,於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾,備用.其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後,備用.2、培養基的製備及儲存 （1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內.加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經常攪拌,防止焦結,待其溶解後補足水分.在使用乾燥培養基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然後稱取一定量培養基幹粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振盪,或延長時間以促進溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養成分被破壞.（2）校正酸鹼度（調節pH）：培養基必須有適當的pH.因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一,測定pH的標準溫度為25士2℃.調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當調節緩衝液的pH時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右,滅菌後基本合適.因此對培養基、緩衝液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定,並記下每次pH的測定結果,有助於積累資料考察每種培養基、緩衝液、試劑對滅菌程式的耐受性,從而指導滅菌前pH的調節.乾燥培養基一般已校正過pH,用時也必須再驗證.測定時,一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化,或用pH計校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或鹼液加以校正.調整pH後要加熱過濾,使培養基澄清.（3）培養基的分裝：大批次配製時使用的自動分配器須經校準和確認.每次使用前後,均要對分配器的管道系統進行沖洗,在分裝無菌培養基前,則要採用無菌矽膠管.固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管.平皿：傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑膠平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min.讓水蒸汽自然蒸發.斜面：製備低層斜面分裝於試管,約佔容積1/5,滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木杆上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基,如沾有培養基應用布抹去,以避免汙染.高層斜面：製備高層斜面分裝於試管,約佔試管容積的1/3,滅菌後趁熱放置成高層短斜面,待其凝固後應用.分裝好的培養基或緩衝液等及時密封后必須在配製當天（2h內最佳）進行滅菌處理.液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基,滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中.培養基的滅菌：培養基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定.普通培養基採用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應延長至20min.含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續3d,間歇滅菌.血清或組織液,採用低熱56—58水浴1h,連續5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等,可用細菌過濾器,過濾除菌.高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內的空氣,再逐漸升壓保持預定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物.以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認,如不同型別培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kPa滅菌30min為好.