做好血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗的方法：

電泳時，電壓應控制在 110 ～ 140V ，不能過高，若電壓太高，產熱量大，則蛋白質標本會破壞，並且電壓高則帶電顆粒移動速度快，分離效果不理想。醋酸纖維素薄膜在電泳前，一定要在緩衝液中浸透，否則有礙電泳分離，最好是浸泡過夜，效果最佳。點樣時樣品一定要點在無 光澤面，否則很難吸入，點樣量 不宜過多（血清樣品最適宜 3μl ）。其原因是醋酸纖維素薄膜承受蛋白質有限。量過多則分子量相近的物質相互爭奪遷移而重疊，影響結果觀察。電泳開始後，不能再取放薄膜，以防觸電。如必需進行，要先關閉電源。影響電泳的主要因素：電泳介質 pH 值的影響 : 對於蛋白質和氨基酸等兩性分子，電泳介質的 pH 值影響蛋白質的電離情況，即可決定蛋白質的帶電量 (Q) 。 pH 值小於等電點，分子帶正電荷，向負極泳動，如果 pH 大於等電點，分子帶負電荷，向正極泳動。 pH 值偏離等電點越遠，分子所帶淨電荷越多，其泳動速度越快。當緩衝液 pH 等於其等電點時，分子處於等電狀態，不移動。由於血清蛋白質的等電點多在 pH4 ～ 6 之間，因此，分離血清蛋白常用 pH 8.6 的巴比妥緩衝液或三羥甲基氨基甲烷 (Tris) 緩衝液。緩衝液的離子強度 : 離子強度低，電泳速度快，分離區帶不易清晰；離子強度高，電泳速度慢，但區帶分離清晰。如離子強度過低，緩衝液的緩衝量小，不易維持 pH 的恆定；離子強度過高，則降低蛋白質的帶電量 ( 壓縮雙電層 ) 使電泳速度減慢。所以常用離子強度為 0.02 ～ 0.2 之間。電場強度的影響 : 電場強度和電泳速度成正比關係。電場強度以每釐米的電勢差計算，也稱電勢梯度。如紙電泳的濾紙長 15cm ，兩端電壓 ( 電勢差 ) 為 150V ，則電場強度為 150 ／ 15=10 V ／ cm ，電場強度愈高，則帶電粒子的移動愈快。 隨著電場強度的增高，電流強度增加，產熱也增多。產熱的不良後果是： ① 引起水的蒸發，改變溶液 pH 及離子強度； ② 引起介質溫度高，可使蛋白質變性。因此電泳必須控制電壓在一定範圍之內，當進行高壓電泳時，必須裝備有效的冷卻裝置。電滲 : 在電場中，由於多孔支援物吸附水中的離子使支援物表面相對帶電，在電場作用下，溶液就向一定方向移動，此種現象稱為電滲。如紙上電泳所用的濾紙纖維素帶有負電荷；瓊脂糖電泳中，所用的瓊脂糖由於大量硫酸根的存在也帶有負電荷，它們使水感應產生水合氫離子 (H+3O) 。在外電場的作用下，水向負極移動。如果被測定樣品也帶正電荷，則移動更快；如果被測定樣品帶負電荷，則移動減慢。所以電泳時，顆粒泳動所表現的速度決定於顆粒本身的泳動速度和溶液的電滲作用。因此在選用支援物時，應儘量避免高電滲作用的物質。