rtpcr時提取rna的濃度和純度要求：濃度20ng/ul以上足夠了，如果用的是組織提取，濃度一般很高，可以達到幾百甚至幾千。如果你用的是病毒、少量細胞，濃度低一些也沒有關係。 純度需要用儀器測一下。260/280理論值應該有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。 RT-PCR：最重要的是RNA是否有明顯降解，這個需要跑電泳看。一般來說28S應該比18S亮1.5-2.0倍，說明提取得不錯。 反轉錄·聚合酶鏈反應（reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR）是將RNA的反轉錄（reversetranscription）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的汙染。 提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo（dT）或隨機引物利用反轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板經行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。
rtpcr時提取rna的濃度和純度要求：濃度20ng/ul以上足夠了，如果用的是組織提取，濃度一般很高，可以達到幾百甚至幾千。如果你用的是病毒、少量細胞，濃度低一些也沒有關係。 純度需要用儀器測一下。260/280理論值應該有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。 RT-PCR：最重要的是RNA是否有明顯降解，這個需要跑電泳看。一般來說28S應該比18S亮1.5-2.0倍，說明提取得不錯。 反轉錄·聚合酶鏈反應（reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR）是將RNA的反轉錄（reversetranscription）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的汙染。 提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo（dT）或隨機引物利用反轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板經行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。