原因一：過早開啟滅菌鍋

當滅菌鍋壓力錶示數為0而溫度表示數還高與室溫時，不要開啟滅菌鍋。因為開啟鍋蓋瞬間，鍋內大量熱量散出，溫度突然降低，試管內溫度也隨著降低，導致管內氣減小，沸點降低，部分水會汽化留在小導管內。

解決辦法：等滅菌鍋內氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再開啟滅菌鍋。

**原因二：試管塞塞得太緊（使用矽膠塞的時候）

試管塞塞得太緊在滅菌時會導致試管內與滅菌鍋內壓力不一致。在滅菌鍋升溫升壓時，鍋內壓力會大於管內壓力；滅菌鍋降溫降壓時，鍋內壓力小於管內壓力。鍋內壓力會大於管內壓力時，試管內壓力不夠，不能將小導管內氣體排盡，就留有氣泡；鍋內壓力小於管內壓力時，可能會使試管塞和培養基崩出，培養基報廢。

解決辦法：改用透氣性好的棉花塞，切勿使用橡皮塞。

*原因三：小導管口太小

我們可以把一根毛細管一端封口，另一端插進水裡，毛細管裡怎麼都不會進水。同樣把一個燒杯倒扣進水裡就很容易進水了。小導管在加壓後一方面水要進去，另外裡面的空氣要出來，如果口太小的話，空氣不容易出去，水也不容易進來，就會導致氣泡六在裡面了。

解決辦法：改用內空較大的導管，儘量使用V型管，不要使用錐型管。

原因四：培養基質量引起

由培養基質量引起的氣體不能排盡或培養基含有高溫高壓分解產氣的成分。滅菌時用水做培養基組的對照試驗，若培養基組有氣泡，而對照組沒有氣泡，可確定是有此原因引起。

解決辦法：改用其它培養基。

原因五：滅菌鍋工作壓力不夠，使氣體不能排盡

滅菌鍋最大壓力不夠不能使管內液體強行把氣體擠出，最後還留有小氣泡，還會使溫度上升緩慢，或達不到滅菌溫度。此原因的可能性較小，我們可以在排除原因一、二、三、四的情況下，用不加試管塞、大口導管做試驗，若還仍不能達到效果，就要檢查滅菌鍋了。

解決辦法：修理滅菌鍋。