PCR產物測序要求最低的濃度是多少
主要看的是PCR產物的量,已純化一般要求總量500ng以上,未純化1ug以上,這個量是一般情況,還要看你的產物長度,短的話可以少一些,長的話可能還要多送一些,供你參考。具體最好諮詢你要送測序的測序公司,這樣即符合他們的要求就可以,同時也不會因為樣品量的問題耽誤你自己的實驗程序。
純化的pcr產物測序需要的要求:
(1)擴增產物必須特異性擴增,條帶單一。如果擴增產物中存在非特異性擴增產物,一般難以得到好的測序結果;
(2)必須進行膠回收純化;
(3)DNA純度在1.6-2.0之間,濃度50ng/ul以上。
方法
(1) 在PCR反應液中加入3倍體積的Buffer PCR-A,若需加入的Buffer PCR-A不足100μl,則加入100μl。
(2) 將DNA-prep Tube置於2-ml Microfuge Tube中,將步驟⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中,5500rpm離心1min。
(3) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,加入500μl Buffer W1,5500rpm離心1min。
(4) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中,加入700μl 已加無水乙醇的Buffer W2,5500rpm離心1min,以同樣的方法再用700μl已加無水乙醇的BufferW2洗滌一次。
(5) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,14000rpm離心1min。
(6) 連濾液一併棄掉收集管,將DNA-prep Tube 置於一新的1.5ml 離心管中,在silica 膜中央加入25-30μl Eluent或去離子水(65℃預熱)。 (7) 室溫靜置2min,14000rpm離心1min洗脫DNA。 (8) 取5μl樣品,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測純化結果。
PCR產物測序要求最低的濃度是多少
主要看的是PCR產物的量,已純化一般要求總量500ng以上,未純化1ug以上,這個量是一般情況,還要看你的產物長度,短的話可以少一些,長的話可能還要多送一些,供你參考。具體最好諮詢你要送測序的測序公司,這樣即符合他們的要求就可以,同時也不會因為樣品量的問題耽誤你自己的實驗程序。
純化的pcr產物測序需要的要求:
(1)擴增產物必須特異性擴增,條帶單一。如果擴增產物中存在非特異性擴增產物,一般難以得到好的測序結果;
(2)必須進行膠回收純化;
(3)DNA純度在1.6-2.0之間,濃度50ng/ul以上。
方法
(1) 在PCR反應液中加入3倍體積的Buffer PCR-A,若需加入的Buffer PCR-A不足100μl,則加入100μl。
(2) 將DNA-prep Tube置於2-ml Microfuge Tube中,將步驟⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中,5500rpm離心1min。
(3) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,加入500μl Buffer W1,5500rpm離心1min。
(4) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中,加入700μl 已加無水乙醇的Buffer W2,5500rpm離心1min,以同樣的方法再用700μl已加無水乙醇的BufferW2洗滌一次。
(5) 棄濾液,將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,14000rpm離心1min。
(6) 連濾液一併棄掉收集管,將DNA-prep Tube 置於一新的1.5ml 離心管中,在silica 膜中央加入25-30μl Eluent或去離子水(65℃預熱)。 (7) 室溫靜置2min,14000rpm離心1min洗脫DNA。 (8) 取5μl樣品,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測純化結果。