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  • 1 # 使用者3417633067606

    離子交換層析法 (ion exchange chromatography,簡稱IEC)是從複雜的混合物中,分離性質相似大分子的方法之一,依據的原理是物質的酸鹼性、極性,也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質,對管柱上的離子交換劑有不同的親和力,改變沖洗液的離子強度和pH值,物質就能依次從層析柱中分離出來。

    離子交換層析法大致分為5個步驟:

    1. 離子擴散到樹脂表面。

    2. 離子透過樹脂擴散到交換位置。

    3. 在交換位置進行離子交換;被交換的分子所帶電荷愈多,它與樹脂的結合愈緊密,也就愈不容易被其它離子取代。

    4. 被交換的離子擴散到樹脂表面。

    5. 沖洗液透過,被交換的離子擴散到外部溶液中。

    離子交換樹脂的交換反應是可逆的,遵循化學平衡的規律,定量的混合物透過管柱時,離子不斷被交換,濃度逐漸降低,幾乎全部都能被吸附在樹脂上;在沖洗的過程中,由於連續新增新的交換溶液,所以會朝正反應方向移動,因而可以把樹脂上的離子沖洗下來。

    如果被純化的物質是氨基酸類的分子,則分子上的淨電荷取決於氨基酸的等電點和溶液的pH值,所以當溶液的pH 值較低,氨基酸分子帶正電荷,它將結合到強酸性的陽離子交換樹脂上;隨著透過的緩衝液pH逐漸增加,氨基酸將逐漸失去正電荷,結合力減弱,最後被洗下來。由於不同的氨基酸等電點不同,這些氨基酸將依次被洗出,最先被洗出的是酸性氨基酸,如apartic acid和glutamic acid(在約pH3~4時),隨後是中性氨基酸,如glycine和alanine。鹼性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的緩衝液中仍帶有正電荷,因此這些在約pH值高達10~11時才出現。

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