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  • 1 # 使用者5443769950533

    ARDRA(核糖體DNA擴增片段限制性內切酶分析,Amplifed Ribosomal DNA Restriction Analysis) 是美國最新發展起來的一項現代生物鑑定技術,它依據原核生物rDNA序列的保守性,將擴增的rDNA片段進行酶切,然後透過酶切圖譜來分析菌間的多樣性。

    RFLP標記是發展最早的DNA標記技術。RFLP是指基因型之間限制性片段長度的差異,這種差異是由限制性酶切位點上鹼基的插入、缺失、失重排或點突變所引起的。

    RFLP技術主要包括以下基本步驟: DNA提取→用限制性內切酶酶切DNA→用凝膠電泳分開DNA片段→把DNA片段轉移到濾膜上→利用放射性標記的探針雜交顯示特定的DNA片段(Southern雜交)和結果分析。

    RFLP遍佈整個基因組,並且非常穩定,但RFLP實驗操作繁瑣,檢測週期長,成本高昂,不適於大規模的分子育種,在植物分子標記輔助育種中需要將RFLP轉換成以PCR為基礎的標記。

    RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphisma,限制性內切酶片段長度多型性)作為第一代分子生物學標記自問世以來已廣泛運用於多門生物學科研究中,但它運用於植物抗性研究還只是近幾年的事。RFLP能對植物的抗性基因進行定位和分離,利用RFLP技術,對於核基因組或葉綠體基因組、尤其是後者,若能提取純淨DNA,則可直接從酶切後的電泳圖譜看出其多型性,利用這一方法可以測定種群內、種群間不同水平的物種在汙染環境下抗性分化進化水平上的差異。

    與核酸序列分析相比,RFLP可省去序列分析中許多非常繁瑣工序,但相對RAPD 而言,RFLP方法更費時、費力,需要進行DNA多種酶切、轉膜以及探針的製備等多個步驟,僅對基因組單複製序列進行鑑定。但RFLP又有比RAPD優越之處, 它可以用來測定多型性是由父本還是母本產生的,也可用來測定由多型性產生的突變型別究竟是由鹼基突變或倒位、 還是由缺失、插入造成的。

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