對於簡單的酶促反應

　　E＋S＝＝ES → E＋P 雙曲線方程可以寫成：

　　Vmax[S]

　　V＝——————（3.1）

　　Km＋[S]

　　這個方程稱為Michaelis-Menten方程，是在假定存在一個穩態反應條件下推匯出來的，其中 Km 值稱為米氏常數，Vmax是酶被底物飽和時的反應速度，[S]為底物濃度。由此可見Km值的物理意義為反應達到1/2Vmax的底物濃度，單位一般為mol/L，只由酶的性質決定，而與酶的濃度無關。可用Km的值鑑別不同的酶。當底物濃度非常大時，反應速度接近於一個恆定值。在曲線的這個區域，酶幾乎被底物飽和，反應相對於底物S是個零級反應。就是說再增加底物對反應速度沒有什麼影響。反應速度逐漸趨近的恆定值稱為最大反應速度Vmax。對於給定酶量的Vmax可以定義為處於飽和底物濃度的起始反應速度n。對於反應曲線的這個假一級反應區的速度方程可寫成一種等價形式：

　　n（飽和時）＝Vmax＝k[E][S]0＝k[E]total＝k cat[ES] （3.2）

　　速度常數k等於催化常數k cat，k cat是ES轉化為遊離的E和產物的速度常數。飽和時，所有的E都是以ES存在。方程（3.2）中還有另一個簡單的關係式：Vmax＝k cat [E]total。從中得出：k cat＝Vmax / [E]total。k cat的單位是s－1。催化常數可以衡量一個酶促反應的快慢。

　　米氏常數Km是酶促反應速度n為最大酶促反應速度值一半時的底物濃度。這可透過用[S]取代米氏方程（3.1）中的Km證明，透過計算可得n＝Vmax /2。

　　雙倒數作圖

　　酶促反應中的Km和Vmax值有幾種測量方法。固定反應中的酶濃度，然後分析幾種不同底物濃度下的起始速度，就可獲得Km和Vmax值。但直接從起始速度對底物濃度的圖中確定Km或Vmax值是很困難的，因為曲線接近Vmax時是個漸進過程。所以通常都是利用米氏方程的轉換形式求出Km和Vmax值。常用的米氏方程轉換形式是Lineweaver-Burk方程，也稱為雙倒數方程。

　　1 Km 1　1

　　——＝ ———·——＋———（3.9）

　　n Vmax [S] Vmax

　　使1/ v 對1/[S]作圖，可以獲得一條直線（如左圖）。從直線與x軸的截距可以得到1/Km的絕對值；而1/Vmax是直線與y軸的截距。雙倒數作圖直觀、容易理解，為酶抑制研究提供了易於識別的圖形。