革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（HansChristianGram，1853年－1938年）於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。
根據細菌的革蘭氏染色性質，可以縮小鑑定範圍，有利於進一步分離鑑定，以對疾病做出診斷。
步驟
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鐘。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘後，自來水沖洗。乾燥，鏡檢。
原理
透過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此透過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
染色的差異主要是由於陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。
①革蘭氏陽性細菌的細胞壁
G+細菌細胞壁具有較厚（20-80nm）而緻密的肽聚糖層，多達50層，佔細胞壁成分的40%～95%，它同細胞膜的外層緊密相連（圖2-9）。有的G+細菌細胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid），也稱胞壁質（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。由於磷壁酸帶負電荷，它在細胞表面能調節陽離子濃度。磷壁酸與細胞生長有關，細胞生長中有自溶素（autolysins）酶類起作用，磷壁酸對自溶素有調節功能，阻止胞壁過度降解和壁溶。
如果細胞壁的肽聚糖層被消溶，G+細胞成為原生質體（protoplasts），細胞壁不復存在，而只存留細胞膜。除鏈球菌外，大多數G+細菌細胞壁中含極少蛋白質。
②革蘭氏陰性細菌的細胞壁G—細菌細胞壁比G+細菌細胞壁薄（15～20nm）而結構較複雜，分外膜（outermembrane）和肽聚糖層（2～3nm）（圖2-10）。在細胞壁和細胞質膜之間有一個明顯的空間，稱為壁膜間隙（periplasmicspace）。
外膜G—細菌細胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同細胞質膜相同之處也是雙層類脂，但除磷脂外還含有多糖和蛋白質。
LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特異多糖。O-特異多糖由重複分支的碳水化合物分子組成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脫氧已糖。由於糖的種類不同，使各種G—細胞具有不同特性的LPS。核心多糖（corepolysaccharide）的主要組分是酮脫氧辛酸（ketodeoxyoctonate,KDO）。
外膜中還含有幾種蛋白，如脂蛋白、通透蛋白。有些蛋白具有通孔作用（porin），調控外界分子進入細胞；有的蛋白分子可以作為噬菌體的受體；許多G—細菌對高等生物有致病性是由LPS的成分決定的，它的毒性組分常稱為內毒素（endotoxins）。
肽聚糖層G—細菌細胞壁的肽聚糖層很薄，在大腸桿菌和其它細菌中僅有單
層。肽聚糖層和外膜的內層之間透過脂蛋白連線起來。
壁膜間隙G—細菌細胞壁的外膜與細胞質膜之間存在明顯的壁膜間隙，一層薄的肽聚糖處於其間，肽聚糖層和細胞質膜之間的間隙較寬，肽聚糖層至外膜之間的間隙較窄。大腸桿菌的壁膜間隙寬度為12～15nm，呈膠腖態。其間含有三類蛋白質：水解酶，催化食物的初步降解；結合蛋白，啟動物質轉運過程；化學受體（chemoreceptors），在趨化性中起作用的蛋白。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（HansChristianGram，1853年－1938年）於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。
根據細菌的革蘭氏染色性質，可以縮小鑑定範圍，有利於進一步分離鑑定，以對疾病做出診斷。
步驟
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鐘。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘後，自來水沖洗。乾燥，鏡檢。
原理
透過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此透過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
染色的差異主要是由於陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。
①革蘭氏陽性細菌的細胞壁
G+細菌細胞壁具有較厚（20-80nm）而緻密的肽聚糖層，多達50層，佔細胞壁成分的40%～95%，它同細胞膜的外層緊密相連（圖2-9）。有的G+細菌細胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid），也稱胞壁質（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。由於磷壁酸帶負電荷，它在細胞表面能調節陽離子濃度。磷壁酸與細胞生長有關，細胞生長中有自溶素（autolysins）酶類起作用，磷壁酸對自溶素有調節功能，阻止胞壁過度降解和壁溶。
如果細胞壁的肽聚糖層被消溶，G+細胞成為原生質體（protoplasts），細胞壁不復存在，而只存留細胞膜。除鏈球菌外，大多數G+細菌細胞壁中含極少蛋白質。
②革蘭氏陰性細菌的細胞壁G—細菌細胞壁比G+細菌細胞壁薄（15～20nm）而結構較複雜，分外膜（outermembrane）和肽聚糖層（2～3nm）（圖2-10）。在細胞壁和細胞質膜之間有一個明顯的空間，稱為壁膜間隙（periplasmicspace）。
外膜G—細菌細胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同細胞質膜相同之處也是雙層類脂，但除磷脂外還含有多糖和蛋白質。
LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特異多糖。O-特異多糖由重複分支的碳水化合物分子組成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脫氧已糖。由於糖的種類不同，使各種G—細胞具有不同特性的LPS。核心多糖（corepolysaccharide）的主要組分是酮脫氧辛酸（ketodeoxyoctonate,KDO）。
外膜中還含有幾種蛋白，如脂蛋白、通透蛋白。有些蛋白具有通孔作用（porin），調控外界分子進入細胞；有的蛋白分子可以作為噬菌體的受體；許多G—細菌對高等生物有致病性是由LPS的成分決定的，它的毒性組分常稱為內毒素（endotoxins）。
肽聚糖層G—細菌細胞壁的肽聚糖層很薄，在大腸桿菌和其它細菌中僅有單
層。肽聚糖層和外膜的內層之間透過脂蛋白連線起來。
壁膜間隙G—細菌細胞壁的外膜與細胞質膜之間存在明顯的壁膜間隙，一層薄的肽聚糖處於其間，肽聚糖層和細胞質膜之間的間隙較寬，肽聚糖層至外膜之間的間隙較窄。大腸桿菌的壁膜間隙寬度為12～15nm，呈膠腖態。其間含有三類蛋白質：水解酶，催化食物的初步降解；結合蛋白，啟動物質轉運過程；化學受體（chemoreceptors），在趨化性中起作用的蛋白。