1、在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl dNTP mix （2mM）

4 μl 引物1（10pM）

2 μl 引物2（10pM）

2 μl Taq酶 （2U/μl）

1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl 加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或新增石蠟油。

2、調整好反應程式。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入迴圈擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，迴圈30-35次，最後在72℃ 保溫7min。

3、結束反應，PCR產物放置於4℃待電泳檢測或-20℃長期儲存。

4、PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。