原因1：試劑盒未充分平衡，
解決辦法：試劑盒從2～8℃冰箱取出後開啟盒蓋，於室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。
原因2：樣品不適合做ELISA檢測
解決辦法：樣品一般選擇培養上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要最佳化檢測的條件（例如稀釋液的成分）。
原因3：酶標板在貯存或洗後拍干時過分乾燥
解決辦法：防止板過於乾燥。
原因4：包被抗體遭到破壞
解決辦法：操作溫和，移液槍不能碰到孔底。
原因5：樣本和抗體孵育條件不合適
解決辦法：按照說明書條件，建議孵育過程中全程振盪孵育。
原因6：洗滌浸泡時間過長
解決辦法：按照說明書操作，勿人為增加浸泡時間。
原因7：偶聯HRP試劑汙染
解決辦法：棄去試劑，重新配置。
原因8：錯誤的誤稀釋偶聯HRP試劑
原因9：TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要最佳化孵育時間
解決辦法：確定合適的孵育時間人為判定-最高濃度S1出現深藍色，S4-5有淡藍色。或機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65。
原因10： 樣本濃度過高或存在基質效應
解決辦法：建議做不同稀釋倍數，確認樣本最佳稀釋倍數。
原因11：酶標儀濾光片設定有問題或者波長選擇不對
解決辦法：確認儀器設定及選擇正確的波長檢測。
原因12： 酶標板不適合做ELISA
解決辦法：不能使用細胞培養板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。
科 潤 達 生 物 提供解答：總結為避免顯色淡靈敏度低，需注意以下幾點：
1、 常規ELISA試劑盒平衡至30min；
2、 檢測抗體、偶聯HRP請按說明書稀釋比；
3、 樣本、抗體孵育條件（溫度、轉速），請根據說明書；
4、 控制TMB底物顯色時間。
原因1：試劑盒未充分平衡，
解決辦法：試劑盒從2～8℃冰箱取出後開啟盒蓋，於室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。
原因2：樣品不適合做ELISA檢測
解決辦法：樣品一般選擇培養上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要最佳化檢測的條件（例如稀釋液的成分）。
原因3：酶標板在貯存或洗後拍干時過分乾燥
解決辦法：防止板過於乾燥。
原因4：包被抗體遭到破壞
解決辦法：操作溫和，移液槍不能碰到孔底。
原因5：樣本和抗體孵育條件不合適
解決辦法：按照說明書條件，建議孵育過程中全程振盪孵育。
原因6：洗滌浸泡時間過長
解決辦法：按照說明書操作，勿人為增加浸泡時間。
原因7：偶聯HRP試劑汙染
解決辦法：棄去試劑，重新配置。
原因8：錯誤的誤稀釋偶聯HRP試劑
解決辦法：棄去試劑，重新配置。
原因9：TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要最佳化孵育時間
解決辦法：確定合適的孵育時間人為判定-最高濃度S1出現深藍色，S4-5有淡藍色。或機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65。
原因10： 樣本濃度過高或存在基質效應
解決辦法：建議做不同稀釋倍數，確認樣本最佳稀釋倍數。
原因11：酶標儀濾光片設定有問題或者波長選擇不對
解決辦法：確認儀器設定及選擇正確的波長檢測。
原因12： 酶標板不適合做ELISA
解決辦法：不能使用細胞培養板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。
科 潤 達 生 物 提供解答：總結為避免顯色淡靈敏度低，需注意以下幾點：
1、 常規ELISA試劑盒平衡至30min；
2、 檢測抗體、偶聯HRP請按說明書稀釋比；
3、 樣本、抗體孵育條件（溫度、轉速），請根據說明書；
4、 控制TMB底物顯色時間。