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  • 1 # 使用者2458114238191884

     鹽析法和透析法:

      鹽析法是在中藥水提液中,加入無機鹽至一定濃度,或達飽和狀態,可使某些成分在水中溶解度降低,從而與水溶性大的雜質分離。

      膠體的鹽析是加鹽而使膠粒的溶解度降低,形成沉底析出的過程,是膠體的聚沉現象的一種。

      透析法是利用小分子物質在溶液中可透過半透膜,而大分子物質不能透過半透膜的性質,達到分離的方法。

      透析袋的原理:透析是指溶質從半透膜的一側透過膜至另一側的過程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要該膜含有使一定大小的溶質透過的孔徑,那麼這些溶質就可以透過彌散和對流從膜的一側移動到膜的另一側。人體內的毒物包括代謝產物,藥物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合適,就能夠透過透析清除體外。其基本原理是彌散和對流。彌散就是半透膜兩側液體各自所含溶質濃度梯度及它所形成的不同滲透濃度,溶質從濃度高的一側透過半透膜向濃度低的一側移動。對流也稱超濾,是指溶質和溶劑因透析膜兩側的靜水壓和滲透壓梯度的不同而跨膜轉運的過程。

      透析袋的使用方法

      使用前處理:

      1. 把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。

      2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。

      3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。

      4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。

      5.冷卻後,存放於4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋是必須戴手套。

      6. 用前在透析袋內裝滿水然後排出,將之清洗乾淨。

      鹽析操作注意事項

      1. 鹽析的成敗決定於溶液的pH值與離子強度,溶液pH值越接近蛋白的等電點,蛋白質越容易沉澱。

      2. 鹽析一般用的硫酸銨,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平鋪放入烤箱內60攝氏度烘乾後再稱量,這樣更準確。

      3. 在加入鹽時應該緩慢均勻,攪拌也要緩慢,越到後來速度應該更注意緩慢,如果出現一些未溶解的鹽,應該等其完全溶解後再加鹽,以免引起區域性的鹽濃度過高,導致酶失活。

      4. 鹽析後最好攪拌40分鐘到一個小時而且再在冰浴中放置一段時間。3.5為了避免鹽對酶的影響,一般脫鹽處理後再測酶活性。

      5. 鹽析後的蛋白質最好儘快脫鹽處理,以免變性,透析較慢,一般可用超濾或者G-25,G-50 處理。

      6. 一般粗提物蛋白完全沉澱是在硫酸銨濃度在70%左右。

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