Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是細菌和古細菌一種不斷進化適應的免疫防禦機制。CRISPR/Cas9利用一段小 RNA 來識別並進行有效的靶向DNA剪下。主要分為兩個組成部分Cas9核酸酶和gRNA 兩部分。原理是：Cas9結合gRNA， 透過gRNA上的靶點序列，在目標基因組上找到靶點序列，並揭開雙螺旋， Cas9將剪下DNA雙鏈，造成DNA雙鏈斷裂。Cas9使用簡單，比較方便多個靶點同時操作。但是也比較容易脫靶，
現在CRISPR/Cas9 靶向基因操作的應用
1. 細胞系的應用：共轉染cas9質粒與gRNA 質粒到細胞中，48小時後做突變率的檢測，和後續的單克隆培養或細胞株篩選工作。
小動物的基因敲除：體外轉錄cas9和gRNA成RNA，然後顯微注射到動物的受精卵中。
大動物的基因敲除：先在原代細胞株中做好基因敲除（同細胞系方法）， 透過克隆動物技術，將基因敲除的細胞系的細胞核移植到去核的卵細胞中。
4. 植物的基因敲除：已有成功案列。
5. 微生物的基因敲除： 需要表達載體和該物種具有NHEJ修復方式。
推薦公司：北京唯尚立德生物科技有限公司，本人在其做過幾次，效果挺好的。
Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是細菌和古細菌一種不斷進化適應的免疫防禦機制。CRISPR/Cas9利用一段小 RNA 來識別並進行有效的靶向DNA剪下。主要分為兩個組成部分Cas9核酸酶和gRNA 兩部分。原理是：Cas9結合gRNA， 透過gRNA上的靶點序列，在目標基因組上找到靶點序列，並揭開雙螺旋， Cas9將剪下DNA雙鏈，造成DNA雙鏈斷裂。Cas9使用簡單，比較方便多個靶點同時操作。但是也比較容易脫靶，
現在CRISPR/Cas9 靶向基因操作的應用
1. 細胞系的應用：共轉染cas9質粒與gRNA 質粒到細胞中，48小時後做突變率的檢測，和後續的單克隆培養或細胞株篩選工作。
小動物的基因敲除：體外轉錄cas9和gRNA成RNA，然後顯微注射到動物的受精卵中。
大動物的基因敲除：先在原代細胞株中做好基因敲除（同細胞系方法）， 透過克隆動物技術，將基因敲除的細胞系的細胞核移植到去核的卵細胞中。
4. 植物的基因敲除：已有成功案列。
5. 微生物的基因敲除： 需要表達載體和該物種具有NHEJ修復方式。
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