2003年，還在杭州藝校上學的葉祖新被選中出演《情斷上海灘》而進入演藝圈。
2005年，參演古裝電視劇《李小環與苗翠花》，飾演方世玉；同年，參演古裝宮鬥電視劇《大清後宮》，飾演少年道光帝。
2006年參演家庭倫理電視劇《死去活來》，飾演樊濤；參演古裝歷史電視劇《皇上二大爺》，飾演趙金山。
2008年，參演戰爭歷史電視劇《父親的戰爭》，飾演彭龍。
2009年，參演古裝歷史電視劇《楊貴妃秘史》，飾演韋堅；同年參演家族鬥爭電視劇《大管家》，飾演李復修；參演戰爭歷史電視劇《內線》，飾演蘇子童。
2010年，參演古裝歷史電視劇《大唐女巡按》，飾演歐陽；參演古裝神話電視劇《活佛濟公2》，分飾必清、瘦仙童兩角；參演尋親電視劇《杜鵑的女兒》，飾演小吳。[3]
2011年，參演穿越電視劇《步步驚心》，飾演十爺；參演古裝搞笑電視劇《怪俠歐陽德》，飾演淳貝勒。[4]
2012年，參演愛情勵志電視劇《錯點鴛鴦》，飾演冷剛；參演傳奇抗戰題材電視劇《五臺山抗日傳奇之女尼排》，飾演任松良；參演古裝歷史電視劇《薛平貴與王寶釧》，飾演葉公公；參演戰爭歷史電視劇《向著勝利前進》，飾演何醫生；參演古裝武俠電視劇《新白髮魔女傳》，飾演辛龍子；在古裝歷史傳奇電視劇《隋唐英雄》中飾演裴元慶。
2014年，參演古裝神話電視劇《歡天喜地俏冤家》，飾演高富帥；參演都市愛情電視劇《步步驚情》，飾演JACK；參演古裝搞笑愛情電視劇《犀利仁師》，飾演範大同；參演都市愛情電視劇《說好的幸福》，飾演許諾；參演古裝歷史傳奇電視劇《隋唐英雄3》，飾演薛丁山。[2]
2017年，參演由蘇有朋執導的電影《嫌疑人X的獻身》。影片中，葉祖新飾演的警官羅淼參與案件偵破，作為整部影片的線索人物貫穿始終。[5]
2018年1月13日，參加《快樂大本營》。同年，參演電視劇《愛我,你敢嗎?》[6]。9月17日，主演的現實題材電視劇《橙紅年代》播出。
2003年，還在杭州藝校上學的葉祖新被選中出演《情斷上海灘》而進入演藝圈。
2005年，參演古裝電視劇《李小環與苗翠花》，飾演方世玉；同年，參演古裝宮鬥電視劇《大清後宮》，飾演少年道光帝。
2006年參演家庭倫理電視劇《死去活來》，飾演樊濤；參演古裝歷史電視劇《皇上二大爺》，飾演趙金山。
2008年，參演戰爭歷史電視劇《父親的戰爭》，飾演彭龍。
2009年，參演古裝歷史電視劇《楊貴妃秘史》，飾演韋堅；同年參演家族鬥爭電視劇《大管家》，飾演李復修；參演戰爭歷史電視劇《內線》，飾演蘇子童。
2010年，參演古裝歷史電視劇《大唐女巡按》，飾演歐陽；參演古裝神話電視劇《活佛濟公2》，分飾必清、瘦仙童兩角；參演尋親電視劇《杜鵑的女兒》，飾演小吳。[3]
2011年，參演穿越電視劇《步步驚心》，飾演十爺；參演古裝搞笑電視劇《怪俠歐陽德》，飾演淳貝勒。[4]
2012年，參演愛情勵志電視劇《錯點鴛鴦》，飾演冷剛；參演傳奇抗戰題材電視劇《五臺山抗日傳奇之女尼排》，飾演任松良；參演古裝歷史電視劇《薛平貴與王寶釧》，飾演葉公公；參演戰爭歷史電視劇《向著勝利前進》，飾演何醫生；參演古裝武俠電視劇《新白髮魔女傳》，飾演辛龍子；在古裝歷史傳奇電視劇《隋唐英雄》中飾演裴元慶。
2014年，參演古裝神話電視劇《歡天喜地俏冤家》，飾演高富帥；參演都市愛情電視劇《步步驚情》，飾演JACK；參演古裝搞笑愛情電視劇《犀利仁師》，飾演範大同；參演都市愛情電視劇《說好的幸福》，飾演許諾；參演古裝歷史傳奇電視劇《隋唐英雄3》，飾演薛丁山。[2]
2017年，參演由蘇有朋執導的電影《嫌疑人X的獻身》。影片中，葉祖新飾演的警官羅淼參與案件偵破，作為整部影片的線索人物貫穿始終。[5]
2018年1月13日，參加《快樂大本營》。同年，參演電視劇《愛我,你敢嗎?》[6]。9月17日，主演的現實題材電視劇《橙紅年代》播出。