1 核酸雜交

是最常用,最可靠的方法之一.可大規模地分析文庫的克隆子.

1)同源探針:至少含有所需cDNA克隆的一部分確切序列.常用於以一個部分克隆分離cDNA文庫中的全長克隆.

2)部分同源探針:探針的序列與所要篩選的cDNA克隆的序列相關但不相同.常用於克隆家族基因.

3)總cDNA探針:

透過反轉錄酶均勻摻入放射性核苷酸或透過總的或分級分離得到的poly(A)+mRNA進行末端標記而獲得cDNA探針.

cDNA扣除探針:

從第一種mRNA製備cDNA探 針, 連續多次與20倍過量的第二種mRNA雜交;

回收未雜交的cDNA探針, 再與100倍過量的第一種mRNA雜交, 使得原mRNA中的一些特異序列得到高度富集.

* 主要用於探測cDNA文庫中與調節水平有所差別的mRNA克隆.

5)合成寡核苷酸探針

2 特異性免疫學檢測

在cDNA表達文庫中,目的基因的表達產 物能與特異性抗體發生免疫學反應,透過酶學的方法加以檢測

3 cDNA克隆的同胞檢測

將cDNA文庫分成若干組含有10-100個克隆子的易於處理的亞cDNA文庫,對每組亞cDNA文庫進行檢測,當鑑定出陽性庫後再不斷將其分成更細的庫進行檢測,直到獲得陽性單克隆.

4 cDNA克隆的確證

cDNA克隆含有編碼某一特定蛋白質的完整氨基酸序列的開放讀框.

第四節 目的基因的分離

外源基因:

插入到載體內的那個特定的片段基因.

目的基因:

那些已被或者準備要分離,改造,擴增或表達的特定基因或DNA片段.