鄰菲囉啉分光光度法測定鐵含量的原理：

在pH=2~9的溶液中，鄰二氮菲與2價亞鐵離子（Fe2+）發生顯色反應，該反應的選擇性很高，而且生成的橙紅色絡合物非常穩定，lgK穩=21.3（20℃），其溶液在510nm（可見光）有最大吸收峰，利用此顯色反應，可以用可見光分光光度法測定微量鐵。

物質與光作用，具有選擇吸收的特性。有色物質的顏色是該物質與光作用產生的。即有色溶液所呈現的顏色是由於溶液中的物質對光的選擇性吸收所致。由於不同的物質其分子結構不同，對不同波長光的吸收能力也不同，因此具有特徵結構的結構集團，存在選擇吸收特性的最大實收波長，形成最大吸收峰，而產生特有的吸收光譜。

該法測得的鐵含量為試樣中的亞鐵的含量。因為只有2價鐵與鄰菲囉啉形成橘紅色的絡合物。而3價鐵不發生這個顯色反應，但能生成淺藍的絡合物。

擴充套件資料：

鄰菲囉啉的性質：

1、鄰菲囉啉指示劑可透過將1.485g一水合鄰二氮菲和0.695gFeSO4·7H2O溶於100mL水中來配製。用於硫酸高鈰滴定鐵鹽的指示劑。一個相關的配體是紅菲繞啉（BPT），4,7-二苯基-1,10-鄰二氮菲。

2、鄰菲囉啉也可用於烷基鋰化合物含量的分析。使樣品與少量（約1mg）的鄰二氮菲作用，呈深色，再用醇類滴定，直到達到無色的滴定終點。

3、雖然顯色反應的適宜pH值範圍很寬（pH=2~9），但測定時，通常在pH=5的HAc-NaAc緩衝介質中測定。

參考資料：