擴增曲線可以粗略地判斷擴增效率。SYBR Green的雙delta Ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一致。如果不一致，需要對公式進行修正，部分qPCR儀的配套軟體可以做到，直接輸入每對引物的擴增效率。但無論如何，保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。如果擴增效率一致，不同Ct的曲線顯示出來就基本是平行的位移，其傾斜程度基本一致。而如下圖一樣，一條比較“陡”，另一條比較“平”，那麼意味著擴增效率不一致。有可能是引物效率不一，或者個別樣品、反應孔存在抑制PCR的汙染等。 來自肽度時界威客吳博士

我也遇到了類似的問題。提取組織RNA反轉錄後做Q-PCR，選18S做內參基因。以前做一般都10個迴圈左右，最近這一批組織卻22個迴圈。溶解曲線也是好的，反轉錄體系也沒有問題（用以往的RNA同時反轉錄做Q-PCR，18S的CT值還是10左右）。提取RNA好像也沒有問題。我是分離了脂肪組織中的成熟脂肪細胞部分，確實不好提RNA，但是濃度也有300ng/ul左右，260/280是1.8-2.0。