方法/步驟
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1、酸沉鹼提法。
這是一種傳統的分離提取方法。該法是利用大豆中大多數蛋白質在等電點(pH415) 時沉澱的特性,與其他成分分離,沉澱的蛋白質經調節pH 後溶解,因此稱之為酸沉鹼提法。酸沉鹼提的缺陷是: 耗酸、耗鹼量大,廢水處理費用高,產品收率低。該分離提取方法有待改進。但目前仍然是工業化生產的基本方法。
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2、膜分離法。
根據大豆蛋白的分子量大小、形狀及膜與大豆蛋白的適應性,選擇膜材料和不同截留分子量的膜,對大豆蛋白提取液超濾分離,超濾淨化,使非截留組分排除,達到符合標準的分離大豆蛋白液,接著將淨化後的大豆蛋白提取液超濾濃縮到所需的濃度後出料,噴霧乾燥成粉狀大豆分離蛋白。
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3、反膠束萃取分離法。
反膠束是表面活性劑在有機溶劑中形成的一種聚集體,其中表面活性劑的非極性尾在外,與有機溶劑接觸,極性頭在內,形成極性核,該核具有包含水溶液和溶解蛋白質的能力,因而可以用此含有反膠束的有機溶劑從水相中萃取蛋白質。利用反膠束技術從全脂豆粉萃取大豆蛋白,可一次萃取50 %左右。大豆蛋白萃取過程非常快,用非擴散模型解釋較為合理。
該法需要的主要儀器有:自動水分測定儀、氣浴恆溫震盪器、離心機、凱氏定氮儀、分析天平、恆溫磁力攪拌器和微量進樣棒等。
影響反膠束萃取過程的主要因素有表面活性劑的種類及濃度、水相的pH 值、離子強度、溫度等。
反膠束萃取技術的優點是:選擇性高、操作方便、放大容易、萃取劑(反膠束) 相可迴圈利用、分離和濃縮同步進行。其缺點是:蛋白質在現有反膠束體系中穩定性不高,導致萃取前後蛋白質的活性損失較大,因而制約其工業化應用
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4、反相高效液相色譜法
這是對大豆蛋白中7 S 和11 S 球蛋白進行快速分離的一種方法。在分離條件為40 ℃、流速1mL/ min 的條件下,9 min 可完成相應球蛋白的分離。具體方法為:
(1)試劑與試樣。乙腈(CAN) (HPLC 級) 、三氟乙酸( TFA) (HPLC 級) 、HPLC 級水用於移動相的製備。Tris (三甲基氨基甲烷緩衝劑) 和2 —巰基乙醇(分析級) 用於分離大豆蛋白。大豆蛋白分離樣本可為組織化蛋白、大豆粉、豆奶、強化嬰兒大豆,使用前均測定其蛋白質含量。樣品溶於水,然後於注樣前用0122μm 經無菌處理的多酚濾紙過濾。全部樣品和標樣儲存在3 ℃或冰凍條件下,樣品溶液在分析當天現配,並儲存在冰上備用。
11 S 和7 S 大豆球蛋白在0130 % mol/ L Tris -HCl 緩衝液和含有0101 mol/ L 22巰基乙醇條件下,經高速離心(10000 r/ min) 分別於各自的等電點(pH614 和pH 418) 析出。
(2)高效液相色譜。Hewlett - Packard 1090 II型色譜儀,帶有一個二極體倍增器和HP 9153C 型資料檢測系統,每次進樣20μL 。分離在PLRP - S柱(150 mm ×416mm I. D. ) 中進行,柱中填有多聚苯乙烯- 二乙烯苯顆粒( 300 ! , 8 μm) , 柱留時間(117 min) 透過不被吸附的尿嘧啶測定,蛋白質透過254 nm 紫外吸光值測定。緩慢流動相A 為011 %三氟乙酸( TFA) 水溶液;快速流動相B 為011 % TFA 乙腈溶液。移動相經0145μm 尼龍過濾器過濾,用少量氮氣排氣。
方法/步驟
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1、酸沉鹼提法。
這是一種傳統的分離提取方法。該法是利用大豆中大多數蛋白質在等電點(pH415) 時沉澱的特性,與其他成分分離,沉澱的蛋白質經調節pH 後溶解,因此稱之為酸沉鹼提法。酸沉鹼提的缺陷是: 耗酸、耗鹼量大,廢水處理費用高,產品收率低。該分離提取方法有待改進。但目前仍然是工業化生產的基本方法。
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2、膜分離法。
根據大豆蛋白的分子量大小、形狀及膜與大豆蛋白的適應性,選擇膜材料和不同截留分子量的膜,對大豆蛋白提取液超濾分離,超濾淨化,使非截留組分排除,達到符合標準的分離大豆蛋白液,接著將淨化後的大豆蛋白提取液超濾濃縮到所需的濃度後出料,噴霧乾燥成粉狀大豆分離蛋白。
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3、反膠束萃取分離法。
反膠束是表面活性劑在有機溶劑中形成的一種聚集體,其中表面活性劑的非極性尾在外,與有機溶劑接觸,極性頭在內,形成極性核,該核具有包含水溶液和溶解蛋白質的能力,因而可以用此含有反膠束的有機溶劑從水相中萃取蛋白質。利用反膠束技術從全脂豆粉萃取大豆蛋白,可一次萃取50 %左右。大豆蛋白萃取過程非常快,用非擴散模型解釋較為合理。
該法需要的主要儀器有:自動水分測定儀、氣浴恆溫震盪器、離心機、凱氏定氮儀、分析天平、恆溫磁力攪拌器和微量進樣棒等。
影響反膠束萃取過程的主要因素有表面活性劑的種類及濃度、水相的pH 值、離子強度、溫度等。
反膠束萃取技術的優點是:選擇性高、操作方便、放大容易、萃取劑(反膠束) 相可迴圈利用、分離和濃縮同步進行。其缺點是:蛋白質在現有反膠束體系中穩定性不高,導致萃取前後蛋白質的活性損失較大,因而制約其工業化應用
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4、反相高效液相色譜法
這是對大豆蛋白中7 S 和11 S 球蛋白進行快速分離的一種方法。在分離條件為40 ℃、流速1mL/ min 的條件下,9 min 可完成相應球蛋白的分離。具體方法為:
(1)試劑與試樣。乙腈(CAN) (HPLC 級) 、三氟乙酸( TFA) (HPLC 級) 、HPLC 級水用於移動相的製備。Tris (三甲基氨基甲烷緩衝劑) 和2 —巰基乙醇(分析級) 用於分離大豆蛋白。大豆蛋白分離樣本可為組織化蛋白、大豆粉、豆奶、強化嬰兒大豆,使用前均測定其蛋白質含量。樣品溶於水,然後於注樣前用0122μm 經無菌處理的多酚濾紙過濾。全部樣品和標樣儲存在3 ℃或冰凍條件下,樣品溶液在分析當天現配,並儲存在冰上備用。
11 S 和7 S 大豆球蛋白在0130 % mol/ L Tris -HCl 緩衝液和含有0101 mol/ L 22巰基乙醇條件下,經高速離心(10000 r/ min) 分別於各自的等電點(pH614 和pH 418) 析出。
(2)高效液相色譜。Hewlett - Packard 1090 II型色譜儀,帶有一個二極體倍增器和HP 9153C 型資料檢測系統,每次進樣20μL 。分離在PLRP - S柱(150 mm ×416mm I. D. ) 中進行,柱中填有多聚苯乙烯- 二乙烯苯顆粒( 300 ! , 8 μm) , 柱留時間(117 min) 透過不被吸附的尿嘧啶測定,蛋白質透過254 nm 紫外吸光值測定。緩慢流動相A 為011 %三氟乙酸( TFA) 水溶液;快速流動相B 為011 % TFA 乙腈溶液。移動相經0145μm 尼龍過濾器過濾,用少量氮氣排氣。