金屬、陶瓷器皿:200℃乾熱滅菌過夜。
槍頭等經DEPC水浸泡後滅菌。
詳細版本:
1、所有的組織中均存在RNA酶,人的面板、手指、試劑、容器等均可能被汙染,因此全部實驗過程中均需戴手套操作並經常更換(使用一次性手套)。
2、所用的玻璃或瓷器(如研缽)器皿需置於乾燥烘箱中200℃烘烤2小時以上。凡是不能用高溫烘烤的材料如塑膠容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液處理,再用蒸餾水衝淨。DEPC是RNA酶的化學修飾劑,它和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環反應而抑制酶活性。DEPC與氨水溶液混合會產生致癌物,因而使用時需小心。
3、試驗所用試劑也可用DEPC處理,加入DEPC至0.1%濃度,然後劇烈振盪10分鐘,再煮沸15分鐘或高壓滅菌以消除殘存的DEPC,否則DEPC也能和腺嘌呤作用而破壞mRNA活性。
注意:DEPC能與胺和巰基反應,因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。Tris溶液可用DEPC處理的水配製然後高壓滅菌。
4、配製的溶液如不能高壓滅菌,可用DEPC處理水配製,並儘可能用未曾開封的試劑。除DEPC外,也可用異硫氰酸胍、釩氧核苷酸複合物、RNA酶抑制蛋白等。此外,為了避免mRNA或cDNA吸附在玻璃或塑膠器皿管壁上,所有器皿一律需經矽烷化處理。
DEPC配製:買來的DEPC是液體裝, 取1ml DEPC 加至1000ml蒸餾水,該液體便可以用來浸泡RNA提取過程中所用的EP管,槍頭等,需浸泡至少24小時,用時取出,高壓15分鐘以去除DEPC的毒性。如果是用來配製溶液,也是千分之一的濃度,充分混勻後高壓待冷卻後便可用於配製溶液。
金屬、陶瓷器皿:200℃乾熱滅菌過夜。
槍頭等經DEPC水浸泡後滅菌。
詳細版本:
1、所有的組織中均存在RNA酶,人的面板、手指、試劑、容器等均可能被汙染,因此全部實驗過程中均需戴手套操作並經常更換(使用一次性手套)。
2、所用的玻璃或瓷器(如研缽)器皿需置於乾燥烘箱中200℃烘烤2小時以上。凡是不能用高溫烘烤的材料如塑膠容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液處理,再用蒸餾水衝淨。DEPC是RNA酶的化學修飾劑,它和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環反應而抑制酶活性。DEPC與氨水溶液混合會產生致癌物,因而使用時需小心。
3、試驗所用試劑也可用DEPC處理,加入DEPC至0.1%濃度,然後劇烈振盪10分鐘,再煮沸15分鐘或高壓滅菌以消除殘存的DEPC,否則DEPC也能和腺嘌呤作用而破壞mRNA活性。
注意:DEPC能與胺和巰基反應,因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。Tris溶液可用DEPC處理的水配製然後高壓滅菌。
4、配製的溶液如不能高壓滅菌,可用DEPC處理水配製,並儘可能用未曾開封的試劑。除DEPC外,也可用異硫氰酸胍、釩氧核苷酸複合物、RNA酶抑制蛋白等。此外,為了避免mRNA或cDNA吸附在玻璃或塑膠器皿管壁上,所有器皿一律需經矽烷化處理。
DEPC配製:買來的DEPC是液體裝, 取1ml DEPC 加至1000ml蒸餾水,該液體便可以用來浸泡RNA提取過程中所用的EP管,槍頭等,需浸泡至少24小時,用時取出,高壓15分鐘以去除DEPC的毒性。如果是用來配製溶液,也是千分之一的濃度,充分混勻後高壓待冷卻後便可用於配製溶液。