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    透析袋使用方法和注意事項

    透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜製成袋狀,就叫做透析袋。

    自Thomas Graham 1861年發明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學實驗室最簡便最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的製備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。

    透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜製成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩衝液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。

    透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比於膜的厚度,正比於欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比於膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。

    透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素製成的透析膜,目前常用的是美國Union Carbide (聯合碳化物公司)和美國光譜醫學公司生產的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)通常為1萬左右。

    商品透析袋製成管狀,其扁平寬度為23 mm~50 mm不等。為防乾裂,出廠時都用10%的甘油處理過,並含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其它生物活性物質有害,用前必須除去。可先用50%乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,最後用蒸餾水沖洗即可使用。實驗證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質特別有效。使用後的透析袋洗淨後可存於4℃蒸餾水中,若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗淨涼乾的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重複使用。

    新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗淨,即可使用。使用時,一端用橡皮筋或線繩紮緊,也可以使用特製的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩衝液過量進入袋內將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑膠桶。小量體積溶液的透析,可在袋內放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液麵以下。

    檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等。

    為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設計與製作各種簡易的透析裝置。美國生物醫學公司(Biomed Instruments Inc.)生產的各種型號的Zeineh 透析器,由於使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。

    根據個人使用經驗,建議使用透析袋效果比較好,還有具體需要什麼規格的要看你的目的蛋白量有多大,才能決定使用多大的截留分子量的透析袋,一般截留量 越大價格也就會越高,還有就是透析袋寬度的選擇,要看你的實驗一次需要透析多少量來決定。目前我的實驗室使用的是上海生工的透析袋,寬度70mm 普通型的!

    透析是指溶質從半透膜的一側透過膜至另一側的過程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要該膜含有使一定大小的溶質透過的孔徑,那麼這些溶質就可以透過彌散和對流從膜的一側移動到膜的另一側。人體內的毒物包括代謝產物,藥物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合適,就能夠透過透析清除體外。其基本原理是彌散和對流。彌散就是半透膜兩側液體各自所含溶質濃度梯度及它所形成的不同滲透濃度,溶質從濃度高的一側透過半透膜向濃度低的一側移動。對流也稱超濾,是指溶質和溶劑因透析膜兩側的靜水壓和滲透壓梯度的不同而跨膜轉運的過程。

    透析袋使用前的處理:

    1、把透析袋剪成適當長度(10—20cm)的小段。

    2、在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。

    3、用蒸餾水徹底清洗透析袋。

    4、放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。

    5、冷卻後,存放於4℃,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋時必須帶手套。

    6、用前在透析袋內裝滿水然後排出,將之清洗乾淨,並檢查是否漏液。

    7、透析袋每次使用過後必須再用純水煮沸10分鐘,然後放在純水溶液中4℃儲存。

    8、若透析袋長期不用,必須放在20—50%的酒精溶液中4℃儲存。

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