具體分析如下；

橫幅構圖，在視覺上更穩定與莊嚴。畫中大構圖完全對稱，前景是一張大長桌，橫著、端正的放在畫面的最前方，這一設計強化了畫面的一種穩重感嚴肅感。整圖色彩以棕褐色為主，光線明度由中心向四周環繞放射，這種對稱的構圖很好的烘托出了整幅畫的神秘與莊嚴感。其次，畫面構圖突顯了耶穌的中心位置。

第一，處在畫面中的人物一共有十三個，而耶穌居於中間，左右各有六個人。在呈三人一組的有節奏的構成分佈中，耶穌這一環是唯一打破節奏的點，呈孤立狀態，這種孤立感使得耶穌與眾不同的特殊身份得到了很好的突出。

第二，如果把畫幅橫向和縱向各畫一條中軸線，耶穌的頭就恰好處在這兩條中軸線的交接點上，即畫面的正中心。耶穌佛就是被釘在了這張畫面中心一樣。

第三，畫面以室內為背景，室內的門窗從畫面的中軸線開始對稱、均勻地排列開。門和牆頂的透視線，連同前方大桌子的透視線，都消失於一個透視點上。而這個透視點，便正好在畫面的正中心，即耶穌的頭部。

第四，耶穌金字塔般的造型以及最為鮮豔的紅藍搭配的上衣更加強了耶穌的中心地位和莊嚴感最後，畫面在講究嚴謹、平衡的同時，也並未削弱畫面自身所需要的一種靈動的美感。門徒的三人一組的特殊組合和各有特色的人物造型也加強了畫面的一種次序性、節奏性，甚至具有抽象般的音樂性。整幅畫面既穩定莊嚴，又充斥著變化的、規律的節奏。達芬奇在畫面內部運用瞭如此多的構圖設計手段來為整幅畫面的精神服務。