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  • 1 # 陽光魯寧

    Bradford法測定蛋白質濃度

    (一)實驗原理

    雙縮脲法(Biuret法)和Folin—酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點和許多限制,促使科學家們去尋找更好的蛋

    白質溶液測定的方法。

    1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法(Bradford法),是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白

    質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定

    法。

    考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(max),由465nm變為595n

    m,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。

    在595nm下測定的吸光度值A595,與蛋白質濃度成正比。

    Bradford法的突出優點是:

    (1)靈敏度高,據估計比Lowry法約高四倍,其最低蛋白質檢測量可達1g。這是因為蛋白質與染料結合後產生

    的顏色變化很大,蛋白質-染料複合物有更高的消光係數,因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry法要大的

    多。

    (2)測定快速、簡便,只需加一種試劑。完成一個樣品的測定,只需要5分鐘左右。由於染料與蛋白質結合的

    過程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內保持穩定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩定性最好。

    因而完全不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。

    (3)干擾物質少。如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩衝液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不

    干擾此測定法。

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