（一）儀器
1. 淨化工作臺
2. 離心機
3. 恆溫水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差顯微鏡
6. 培養箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（彎頭、直頭）
2. 培養瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 廢液缸
（三）塑膠器皿
1. 吸頭
2. 槍頭
3. 膠塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml離心管
6. 凍存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加樣槍
2. 紅血球計數板
3. 記號筆
4. 醫用橡皮膏
5. 移液槍
（五）試劑
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培養液
4. 雙抗（青黴素、鏈黴素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO（分析純）或無色新鮮甘油 （一）細胞凍存
1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其儘快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，開啟蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。 1．從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞都可以用於凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液；
2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3．凍存和復甦最好用新配製的培養液。
（一）儀器
1. 淨化工作臺
2. 離心機
3. 恆溫水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差顯微鏡
6. 培養箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（彎頭、直頭）
2. 培養瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 廢液缸
（三）塑膠器皿
1. 吸頭
2. 槍頭
3. 膠塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml離心管
6. 凍存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加樣槍
2. 紅血球計數板
3. 記號筆
4. 醫用橡皮膏
5. 移液槍
（五）試劑
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培養液
4. 雙抗（青黴素、鏈黴素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO（分析純）或無色新鮮甘油 （一）細胞凍存
1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其儘快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，開啟蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。 1．從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞都可以用於凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液；
2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3．凍存和復甦最好用新配製的培養液。