上述7個培養基配方中,馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養基(PDA)應用最普遍,在此著重介紹PDA培養基的配製方法。
(1)配製選擇優質馬鈴薯,去皮,挖去發芽根,削去青皮切成薄片,稱取200克,置於鋼精鍋或鋁鍋,加水1000毫升,煮沸後小火保持30分,用4層紗布過濾,取其汁液(上述配方中麩皮、米糠、玉米粉、黃豆粉、木屑等用同法取其汁液)。若濾液不足1000毫升,加水補足。然後加入瓊脂繼續加熱,待瓊脂完全溶化後,再加入葡萄糖,補水至1000毫升,用玻璃棒攪拌均勻,趁熱分裝試管或三角瓶中備用。(2)分裝試管將配製好的PDA培養基,趁熱到入事先準備好的分裝器或漏斗、量杯,分裝試管。每支試管培養基為管長的1/5~1/4,培養基液不可黏附管口內壁,如有黏附物必須擦試乾淨,以防雜菌感染。(3)塞棉塞棉塞要緊貼管壁,鬆緊度以用手指提起棉塞而不脫掉為宜,光圓不起皺,插入管口的長度為棉塞總長的2/3。然後將塞好棉塞的試管綁紮成捆,管口棉塞處用牛皮紙包紮好,以防滅菌時棉塞受潮,引起雜菌感染。(4)滅菌將包紮成捆的試管,放入手提式高壓滅菌鍋內,在0.15兆帕壓力下滅菌30分鐘。使用手提式高壓鍋時必須按要求進行操作,特別要注意加水和熄火這兩個技術環節,以防燒鍋、水浸試管和試管破裂、衝塞等人為事故。(5)排成斜面將取出的試管冷卻到50~60℃後,放到用木架或木條擺成一定角度的斜面上,使之凝成斜面,傾斜度以斜面達到管長的1/2為度。待完全凝固後,即成試管斜面培養基,供分離、培養母種用。(6)檢驗隨機抽取3~5支試管,置於25~30℃下培養3天左右進行培管查雜。若所查試管培養基表面或內部均無任何變化,則表面滅菌效果好,可供接種培養用;若個別試管的斜面上有雜菌菌落,說明滅菌不徹底,要重新滅菌。這種檢驗不是每次滅菌時都要進行,一般在新購滅菌鍋滅菌時或中途長時間未用和隨機抽驗時才進行這種檢驗的。
上述7個培養基配方中,馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養基(PDA)應用最普遍,在此著重介紹PDA培養基的配製方法。
(1)配製選擇優質馬鈴薯,去皮,挖去發芽根,削去青皮切成薄片,稱取200克,置於鋼精鍋或鋁鍋,加水1000毫升,煮沸後小火保持30分,用4層紗布過濾,取其汁液(上述配方中麩皮、米糠、玉米粉、黃豆粉、木屑等用同法取其汁液)。若濾液不足1000毫升,加水補足。然後加入瓊脂繼續加熱,待瓊脂完全溶化後,再加入葡萄糖,補水至1000毫升,用玻璃棒攪拌均勻,趁熱分裝試管或三角瓶中備用。(2)分裝試管將配製好的PDA培養基,趁熱到入事先準備好的分裝器或漏斗、量杯,分裝試管。每支試管培養基為管長的1/5~1/4,培養基液不可黏附管口內壁,如有黏附物必須擦試乾淨,以防雜菌感染。(3)塞棉塞棉塞要緊貼管壁,鬆緊度以用手指提起棉塞而不脫掉為宜,光圓不起皺,插入管口的長度為棉塞總長的2/3。然後將塞好棉塞的試管綁紮成捆,管口棉塞處用牛皮紙包紮好,以防滅菌時棉塞受潮,引起雜菌感染。(4)滅菌將包紮成捆的試管,放入手提式高壓滅菌鍋內,在0.15兆帕壓力下滅菌30分鐘。使用手提式高壓鍋時必須按要求進行操作,特別要注意加水和熄火這兩個技術環節,以防燒鍋、水浸試管和試管破裂、衝塞等人為事故。(5)排成斜面將取出的試管冷卻到50~60℃後,放到用木架或木條擺成一定角度的斜面上,使之凝成斜面,傾斜度以斜面達到管長的1/2為度。待完全凝固後,即成試管斜面培養基,供分離、培養母種用。(6)檢驗隨機抽取3~5支試管,置於25~30℃下培養3天左右進行培管查雜。若所查試管培養基表面或內部均無任何變化,則表面滅菌效果好,可供接種培養用;若個別試管的斜面上有雜菌菌落,說明滅菌不徹底,要重新滅菌。這種檢驗不是每次滅菌時都要進行,一般在新購滅菌鍋滅菌時或中途長時間未用和隨機抽驗時才進行這種檢驗的。