1、輻射與物質的非吸收作用引起的誤差；

2、熒光與光化學反應的影響，一般說來，熒光對分光光度測量產生的誤差可以忽略，多數情況下顯色體系的熒光效率很小，而且熒光發射是各向同性，只有一小部分沿著透射光方向進入檢測器，使測量吸光度偏低，產生負偏離。熒光對吸收測量的影響極大程度上決定於儀器的吸收池和檢測器光學設計；

3、反射和散射，吸收定律只適用於均勻介質的吸收體系，渾濁溶液因散射使實測吸光度增加，導致偏離比耳定律；

4、儀器的非理想性引起的誤差；

5、複色光對比耳定律的偏離，大多數光度計只能獲得接近於單色光的狹窄的光通帶，實際上仍是有複色光性質，可導致偏離比耳定律。偏離的大小取決於二單色光的摩爾吸光係數差△ε，|△ε|很小時，可近似認為是單色光，在低濃度時，工作曲線仍為直線，但濃度較大時，隨濃度增大，A-C曲線彎曲愈嚴重，故比耳定律只適用於稀溶液；

6、雜散光，雜散光是指進入檢測器的處於待測波長光譜頻寬範圍外的不需要的其它波長組分。其主要來源於分光光度計色散元件稜鏡或光柵、反射鏡、透鏡表面的散射，單色器內壁灰塵及其它元件傷痕的反射和漫射等，雜散光可引起嚴重的測量誤差。在儀器能量處於最小的波長處，雜散光通常處於最大值（如氘燈220nm,鎢燈340nm）；

7、狹縫寬度，狹縫寬度不僅影響光譜的純度，也影響吸光度值。在定量分析時，為了得到足夠的測量訊號，應採用較大的狹縫，在定性分析時則採用較小的狹縫，當出射狹縫和入射狹縫的寬度相等時，狹縫寬度引起的誤差最小；

8、波長標度尺的誤差，波長標度尺即儀器的波長準確度，如誤差較大或未作校正，將光譜測量產生誤差，即影響吸光度測量的準確度（在吸收光譜的尖峰處更為顯著）；

9、不平行入射光的影響，比耳定律的前提條件之一是採用平行入射光束，以保證全部光束透過同一厚度的吸收介質，當入射光束偏離平行性較大時，就明顯導致偏離比耳定律。如果儀器中光束中等強度偏離平行性，引起的吸光度測量誤差一般在0.5%以內；

10、光度標尺的誤差，光度標尺即透射比準確度，其誤差大小直接影響光度測量的準確度。