作用原理聚丙烯醯胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯醯胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開：蛋白大小,形狀和電荷.
而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白.這個技術首先是1967年由shapiro建立,他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去汙劑和強還原劑後,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小,電荷因素可以忽視.
SDS是陰離子去汙劑,作為變性劑和助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去摺疊,破壞蛋白分子的二.三級結構.而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使絆胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂.在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS後,分子被解聚成多肽鏈,解聚後的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的蛋白量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異.
SDS-PAGE一般採用的是不連續緩衝系統,於連續緩衝系統相比,能夠有較高的解析度.
濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶.當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩衝液,電級液選TRIS/甘氨酸.電泳開始後,HCL解離成氯離子,甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子.蛋白質帶負電荷,因此一起向正極移動,其中氯離子最快,甘氨酸根離子最慢,蛋白居中.電泳開始時氯離子泳動率最大,超過蛋白,因此在後面形成低電導區,而電場強度與低電導區成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動,形成以穩定的介面,使蛋白聚集在移動介面附近,濃縮成一中間層.
作用原理聚丙烯醯胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯醯胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開：蛋白大小,形狀和電荷.
而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白.這個技術首先是1967年由shapiro建立,他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去汙劑和強還原劑後,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小,電荷因素可以忽視.
SDS是陰離子去汙劑,作為變性劑和助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去摺疊,破壞蛋白分子的二.三級結構.而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使絆胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂.在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS後,分子被解聚成多肽鏈,解聚後的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的蛋白量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異.
SDS-PAGE一般採用的是不連續緩衝系統,於連續緩衝系統相比,能夠有較高的解析度.
濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶.當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩衝液,電級液選TRIS/甘氨酸.電泳開始後,HCL解離成氯離子,甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子.蛋白質帶負電荷,因此一起向正極移動,其中氯離子最快,甘氨酸根離子最慢,蛋白居中.電泳開始時氯離子泳動率最大,超過蛋白,因此在後面形成低電導區,而電場強度與低電導區成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動,形成以穩定的介面,使蛋白聚集在移動介面附近,濃縮成一中間層.