（1）化學消毒劑的性質
各種化學消毒劑，由於其本身的化學特性和化學結構不同，故而其對微生物的作用方式也各不相同，所以，各類消毒劑的消毒效果也不一致。
（2）微生物的種類
由於微生物本身的形態結構及代謝方式等生物學特性的不同，其對化學消毒劑所表現的反應也不同。如革蘭氏陽性細菌的等電點比革蘭氏陰性菌低。所以，在一定的pH下所帶的負電荷較多，容易與帶正電荷的離子結合。故革蘭氏陽性菌較易與鹼性染料的陽離子、重金屬鹽類的陽離子及去汙劑結合而被滅活。細菌的芽孢因有較厚的芽孢壁和多層芽孢膜，結構堅實，消毒劑不易滲透進去，所以，芽孢對消毒劑的抵抗力比其繁殖體要強得多。
（3）有機物的存在
當微生物所處的環境中有有機物，如糞便、痰液、膿汁、血液及其他排洩物存在時，所有消毒劑的作用都會大大減低甚至無效，其中以季銨化合物、碘製劑、甲醛所受的影響較大，而石炭酸類與戊二醛所受影響較小。因此，將欲消毒的物件先清潔後再施用消毒劑為最基本的要求。
（4）消毒劑的濃度
在一定的範圍內，化學消毒劑的濃度越大，其對微生物的毒性作用也越強。但勢必造成消毒成本提高，對消毒物件的破壞也嚴重，因此各種消毒劑應按其說明書的要求，進行配製。而且有些藥物濃度增加，殺菌力卻可能下降，如70%酒精的殺菌作用比100%的純酒精強。
（5）溫度、溼度及時間
溫度升高可提高消毒殺菌率。大多數消毒劑的消毒作用在溫度上升時顯著增強，尤其是戊二醛類，但易蒸發的碘劑與氯劑例外，加溫至70℃時會變得不穩定而降低消毒效力。許多常用的溫和消毒劑，冰點溫度時毫無作用。在寒冷時，最好是將消毒劑泡於溫水中使用，消毒效果會更佳。燻蒸消毒時，溼度可作為一個環境因素影響消毒效果。用過氧乙酸及甲醛燻蒸消毒時，相對溼度以60%～80%為最好。在其他條件都一定的情況下，作用時間越長，消毒效果越好。消毒劑殺滅細菌所需時間的長短取決於消毒劑的種類、濃度及其殺菌速度，同時也與細菌的種類、數量和所處的環境有關。
（6）酸鹼度（pH）
許多消毒劑的消毒效果均受消毒環境pH的影響。如碘製劑、酸類、來蘇兒等陰離子消毒劑，在酸性環境中殺菌作用增強；而陽離子消毒劑如新潔爾滅等，在鹼性環境中殺菌力增強。另外，pH也影響消毒劑的電離度，一般來說，未電離的分子，較易透過細菌的細胞膜，殺菌效果較好。
（1）化學消毒劑的性質
各種化學消毒劑，由於其本身的化學特性和化學結構不同，故而其對微生物的作用方式也各不相同，所以，各類消毒劑的消毒效果也不一致。
（2）微生物的種類
由於微生物本身的形態結構及代謝方式等生物學特性的不同，其對化學消毒劑所表現的反應也不同。如革蘭氏陽性細菌的等電點比革蘭氏陰性菌低。所以，在一定的pH下所帶的負電荷較多，容易與帶正電荷的離子結合。故革蘭氏陽性菌較易與鹼性染料的陽離子、重金屬鹽類的陽離子及去汙劑結合而被滅活。細菌的芽孢因有較厚的芽孢壁和多層芽孢膜，結構堅實，消毒劑不易滲透進去，所以，芽孢對消毒劑的抵抗力比其繁殖體要強得多。
（3）有機物的存在
當微生物所處的環境中有有機物，如糞便、痰液、膿汁、血液及其他排洩物存在時，所有消毒劑的作用都會大大減低甚至無效，其中以季銨化合物、碘製劑、甲醛所受的影響較大，而石炭酸類與戊二醛所受影響較小。因此，將欲消毒的物件先清潔後再施用消毒劑為最基本的要求。
（4）消毒劑的濃度
在一定的範圍內，化學消毒劑的濃度越大，其對微生物的毒性作用也越強。但勢必造成消毒成本提高，對消毒物件的破壞也嚴重，因此各種消毒劑應按其說明書的要求，進行配製。而且有些藥物濃度增加，殺菌力卻可能下降，如70%酒精的殺菌作用比100%的純酒精強。
（5）溫度、溼度及時間
溫度升高可提高消毒殺菌率。大多數消毒劑的消毒作用在溫度上升時顯著增強，尤其是戊二醛類，但易蒸發的碘劑與氯劑例外，加溫至70℃時會變得不穩定而降低消毒效力。許多常用的溫和消毒劑，冰點溫度時毫無作用。在寒冷時，最好是將消毒劑泡於溫水中使用，消毒效果會更佳。燻蒸消毒時，溼度可作為一個環境因素影響消毒效果。用過氧乙酸及甲醛燻蒸消毒時，相對溼度以60%～80%為最好。在其他條件都一定的情況下，作用時間越長，消毒效果越好。消毒劑殺滅細菌所需時間的長短取決於消毒劑的種類、濃度及其殺菌速度，同時也與細菌的種類、數量和所處的環境有關。
（6）酸鹼度（pH）
許多消毒劑的消毒效果均受消毒環境pH的影響。如碘製劑、酸類、來蘇兒等陰離子消毒劑，在酸性環境中殺菌作用增強；而陽離子消毒劑如新潔爾滅等，在鹼性環境中殺菌力增強。另外，pH也影響消毒劑的電離度，一般來說，未電離的分子，較易透過細菌的細胞膜，殺菌效果較好。