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  • 1 # lanfengz2

    實驗操作注意事項:儘管擴增序列的殘留汙染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉汙染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意:

    (1)戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套。

    (2)使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露於空氣中,避免氣溶膠的汙染。

    (3)避免反應液飛濺,開啟反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體於管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套並用稀酸擦拭桌面。

    (4)操作多份樣品時,製備反應混合液,先將dNTP、緩衝液、引物和酶混合好,然後分裝,這樣即可以減少操作,避免汙染,又可以增加反應的精確度。

    (5)最後加入反應模板,加入後蓋緊反應管。

    (6)操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性。

    (7)儘可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的汙染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區。

    (8)重複實驗,驗證結果,慎下結論。

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