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    實時熒光定量PCR不是用來測濃度的,可以用來做基因的複製數。但是如果你的產物單一,有相應的標準品,也是可以測濃度的,濃度的準確性和你的標準曲線相關。

    實時熒光定量PCR:

    實時熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術,它是透過熒光染料或熒游標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時線上監控反應過程,結合相應的軟體可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。檢測指標是:各樣品的目的基因和管家基因分別進行Realtime PCR反應。PCR產物與 DNA Ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳,GoldView染色,檢測PCR產物是否為單一特異性擴增條帶。

    精確測定DNA濃度的方法:

    DNA純度和濃度的檢測:分光光度(紫外吸收)法1.預熱紫外分光光度計10-20分鐘。2.取所需的比色杯(4ml),其中一隻裝入3 mlH2O溶液,作為空白液,用來校正分光光度計零點及調整透光度至100。3. DNA純度及濃度的測定:①取3微升的DNA樣品加入比色杯,加dH2O至3000微升,混勻。②將比色杯置入分光光度計中,調入射光波長,分別用空白溶液調整零點(T為100,OD為0),測待測樣品在260nm、280nm、230nm的OD值。③計算濃度:DNA濃度(ug/ml)=A260×50ug/ml×稀釋倍數對於雙鏈DNA 1.0 OD260=50 ug/ml對於單鏈RNA 1.0 OD260=40 ug/ml4. 純的DNA溶液其OD260/OD280應為1.8,OD260/OD230應大於2.0。⑴ OD260/OD280大於1.9時,說明有RNA汙染,小於1.6時表明有蛋白質或酚汙染。

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