程式:包括四個階段,即急性毒性試驗,蓄積毒性和致突變試驗,亞慢性毒性(包括繁殖、致畸)試驗和代謝試驗,慢性毒性(包括致癌)試驗。
Ames實驗的具體操作:
①斑點試驗:
吸取測試菌增菌培養後的菌液0.1ml,注入融化並保溫45℃左右的上層軟瓊脂中,需S9活化的再加0.3ml-0.4mlS9mix,立即混勻,傾於底平板上,鋪平冷凝。
用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣,紙片浸溼受試物溶液,或直接取固態受試物,貼放於上層培養基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照,分別貼放於平板上相應位置。
平皿倒置於37℃溫箱培養48h。在紙片外圍長出密集菌落圈,為陽性;菌落散佈,密度與自發回變相似,為陰性。
②平板摻入試驗:
將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中,需代謝活化的再加0.3ml-0.4ml S9mix,混勻後迅速傾於底平板上鋪平冷凝。
同時做陰性和陽性對照,每種處理做3個平行。試樣通常設4個~5個劑量。選擇劑量範圍開始應大些,有陽性或可疑陽性結果時,再在較窄的劑量範圍內確定劑量反應關係。培養同上。
同一劑量各皿回變菌落均數與各陰性對照皿自發回變菌落均數之比,為致變比(MR)。MR值≥2,且有劑量-反應關係,背景正常,則判為致突變陽性。
程式:包括四個階段,即急性毒性試驗,蓄積毒性和致突變試驗,亞慢性毒性(包括繁殖、致畸)試驗和代謝試驗,慢性毒性(包括致癌)試驗。
Ames實驗的具體操作:
①斑點試驗:
吸取測試菌增菌培養後的菌液0.1ml,注入融化並保溫45℃左右的上層軟瓊脂中,需S9活化的再加0.3ml-0.4mlS9mix,立即混勻,傾於底平板上,鋪平冷凝。
用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣,紙片浸溼受試物溶液,或直接取固態受試物,貼放於上層培養基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照,分別貼放於平板上相應位置。
平皿倒置於37℃溫箱培養48h。在紙片外圍長出密集菌落圈,為陽性;菌落散佈,密度與自發回變相似,為陰性。
②平板摻入試驗:
將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中,需代謝活化的再加0.3ml-0.4ml S9mix,混勻後迅速傾於底平板上鋪平冷凝。
同時做陰性和陽性對照,每種處理做3個平行。試樣通常設4個~5個劑量。選擇劑量範圍開始應大些,有陽性或可疑陽性結果時,再在較窄的劑量範圍內確定劑量反應關係。培養同上。
同一劑量各皿回變菌落均數與各陰性對照皿自發回變菌落均數之比,為致變比(MR)。MR值≥2,且有劑量-反應關係,背景正常,則判為致突變陽性。